Antigeenin kalvorakkulakuljetus B-soluissa
Palttila, Katriina (2016)
Palttila, Katriina
Turun ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605106973
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605106973
Tiivistelmä
B-solut ovat tärkeä osa adaptiivista immuniteettia. Ne vastaavat elimistön vasta-aineiden tuotannosta, joiden avulla elimistö pystyy taistelemaan tehokkaasti infektioita vastaan. Erilaistuakseen vasta-aineita tuottaviksi plasmasoluiksi B-solujen täytyy ottaa tunnistamansa antigeeni sisäänsä, pilkkoa se ja esitellä se eteenpäin T-soluille. Antigeenin prosessointiketju B-soluissa tunnetaan vielä erittäin huonosti. Tässä tutkimuksessa antigeenin prosessointiin liittyvät rakenteet on selvitetty aikajanallisesti, eikä tämän tyyppistä tutkimusta tiettävästi ole aiemmin tehty.
Opinnäytetyön tavoitteena oli tutkia antigeeniä pilkkovaa solunsisäistä reittiä EEA1-proteiinin, LAMP1-proteiinin ja Rab-proteiinien avulla. EEA1-proteiini toimii varhaisten endosomien merkkiaineena kun taas LAMP1-proteiini esiintyy myöhäisissä endosomeissa sekä lysosomeissa. Myös Rab-proteiinit toimivat eri soluelinten merkkiaineina. Ne ovat pieniä GTPaaseja, jotka koordinoivat solunsisäistä kalvorakkulakuljetusta.
Tutkimuksessa selvitettiin endogeenisten Rab-proteiinien, EEA1-proteiinin ja LAMP1-proteiinin sijainti B-soluissa sekä niiden keskinäinen vuorovaikutus eri aktivointiaikojen kuluttua. In vitro viljellyt B-solut aktivoitiin liukoisella antigeenillä. Aktivoidut solut immunovärjättiin ensin primaarivasta-aineilla ja sitten fluoresoivilla sekundaarivasta-aineilla. Solujen kuvaus tehtiin spinning disk -konfokaalimikroskoopilla (SDCM). Tutkittaessa LAMP1-proteiinia visuaalisen tarkastelun lisäksi näistä soluista tehtiin myös korrelaatioanalyysit. Lisäksi tutkittiin, miltä Rab5/7/9/11- ja EEA1-proteiinit näyttävät aktivoimattomissa B-soluissa.
Antigeenin prosessointiketjuun osallistuvat keskenään vuorovaikutuksessa olevat Rab-proteiinit ja EEA1- sekä LAMP1-proteiinit. Opinnäytetyössä on havainnollistettu antigeenin prosessointiketju korrelaatiokuvaajien ja SDCM-kuvien avulla. Tutkimuksessa määritellään myös Rab-proteiinien käyttäytyminen aktivoimattomissa B-soluissa. Aktivoimattomia B-soluja tutkittaessa huomattiin, että Rab5/7/9 kerääntyvät niin sanottuun rakkulakeskittymään. Huomattiin myös, että EEA1 ei keräänny Rab-proteiinien tavoin aktivoimattomissa B-soluissa, mutta aktivoinnin jälkeen myös EEA1 kerääntyy rakkulakeskittymään. Rab-proteiineilla havaittiin olevan lisäksi muita rooleja, jotka poikkeavat yleisestä näkemyksestä: esimerkiksi Rab5:n ja EEA1:n rinnakkainen lokalisaatio (ei päällekkäinen) sekä Rab9 ja antigeenin korrelaatio 10 minuutin aikapisteessä.
Opinnäytetyön tavoitteena oli tutkia antigeeniä pilkkovaa solunsisäistä reittiä EEA1-proteiinin, LAMP1-proteiinin ja Rab-proteiinien avulla. EEA1-proteiini toimii varhaisten endosomien merkkiaineena kun taas LAMP1-proteiini esiintyy myöhäisissä endosomeissa sekä lysosomeissa. Myös Rab-proteiinit toimivat eri soluelinten merkkiaineina. Ne ovat pieniä GTPaaseja, jotka koordinoivat solunsisäistä kalvorakkulakuljetusta.
Tutkimuksessa selvitettiin endogeenisten Rab-proteiinien, EEA1-proteiinin ja LAMP1-proteiinin sijainti B-soluissa sekä niiden keskinäinen vuorovaikutus eri aktivointiaikojen kuluttua. In vitro viljellyt B-solut aktivoitiin liukoisella antigeenillä. Aktivoidut solut immunovärjättiin ensin primaarivasta-aineilla ja sitten fluoresoivilla sekundaarivasta-aineilla. Solujen kuvaus tehtiin spinning disk -konfokaalimikroskoopilla (SDCM). Tutkittaessa LAMP1-proteiinia visuaalisen tarkastelun lisäksi näistä soluista tehtiin myös korrelaatioanalyysit. Lisäksi tutkittiin, miltä Rab5/7/9/11- ja EEA1-proteiinit näyttävät aktivoimattomissa B-soluissa.
Antigeenin prosessointiketjuun osallistuvat keskenään vuorovaikutuksessa olevat Rab-proteiinit ja EEA1- sekä LAMP1-proteiinit. Opinnäytetyössä on havainnollistettu antigeenin prosessointiketju korrelaatiokuvaajien ja SDCM-kuvien avulla. Tutkimuksessa määritellään myös Rab-proteiinien käyttäytyminen aktivoimattomissa B-soluissa. Aktivoimattomia B-soluja tutkittaessa huomattiin, että Rab5/7/9 kerääntyvät niin sanottuun rakkulakeskittymään. Huomattiin myös, että EEA1 ei keräänny Rab-proteiinien tavoin aktivoimattomissa B-soluissa, mutta aktivoinnin jälkeen myös EEA1 kerääntyy rakkulakeskittymään. Rab-proteiineilla havaittiin olevan lisäksi muita rooleja, jotka poikkeavat yleisestä näkemyksestä: esimerkiksi Rab5:n ja EEA1:n rinnakkainen lokalisaatio (ei päällekkäinen) sekä Rab9 ja antigeenin korrelaatio 10 minuutin aikapisteessä.