Recovery of enzymes from industrial fermentation and determination of activity assay
Haapoja, Juuso (2016)
Haapoja, Juuso
Turun ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016052610088
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016052610088
Tiivistelmä
Opinnäytetyön aiheena oli luoda MetGen Oy:n tuottamalle entsyymille standardoitu aktiivisuusanalyysi, johon määritettiin käytettävä lämpötila, pH, substraatti sekä puskuriliuos. Entsyymi tuotettiin kahdessa eri tilavuudessa: yhdessä litrassa sekä 250 litrassa. Jokainen fermentointi suoritettiin itsenäisesti alkuvalmisteluista tuotteen talteenottoon saakka. Lopulta analysoitavaksi kerättiin kuusi fermentoinnin lopputuotetta: neljä yhden litran ja kaksi 250 litran fermentoinneista.
Aktiivisuusanalyysi suoritettiin käyttämällä kolmea kaupallista ja kolmea itse valmistettua puskuriliuosta, joiden pH-arvot vaihtelivat välillä 4-6. Analyysin lämpötilana käytettiin kolmea vaihtoehtoa: huoneenlämpötila, 30 °C ja 40 °C. Analyysin substraattina toimi ABTS, jolla aikaansaatiin mitattava värireaktio, jonka absorbanssia mitattiin ajan funktiona. Näiden tulosten perusteella luotiin absorbanssin kasvukaaviot jokaiselle näytteelle sekä laskettiin vertaileva aktiivisuusarvo vertaamalla saatuja tuloksia tunnettuun standardiin.
Aktiivisuusanalyysi antoi selkeitä ja toistettavia tuloksia, joiden perusteella jokaiselle fermentoinnin lopputuotteelle laskettiin standardiin verrattu aktiivisuusarvo. Tuloksissa oli nähtävissä, miten erilaiset olosuhteet vaikuttivat entsyymin aktiivisuuteen. Kaikkien saatujen tulosten perusteella on tehty MetGen Oy:lle ehdotus mitatun entsyymin aktiivisuusanalyysin standardiolosuhteista. Yritykselle on myös tehty ehdotus jatkomittausten suoritusta varten, jotta analyysistä saadaan mahdollisimman tarkkoja vertailuarvoja entsyymin tuleviin käyttöolosuhteisiin verrattuna.
Aktiivisuusanalyysi suoritettiin käyttämällä kolmea kaupallista ja kolmea itse valmistettua puskuriliuosta, joiden pH-arvot vaihtelivat välillä 4-6. Analyysin lämpötilana käytettiin kolmea vaihtoehtoa: huoneenlämpötila, 30 °C ja 40 °C. Analyysin substraattina toimi ABTS, jolla aikaansaatiin mitattava värireaktio, jonka absorbanssia mitattiin ajan funktiona. Näiden tulosten perusteella luotiin absorbanssin kasvukaaviot jokaiselle näytteelle sekä laskettiin vertaileva aktiivisuusarvo vertaamalla saatuja tuloksia tunnettuun standardiin.
Aktiivisuusanalyysi antoi selkeitä ja toistettavia tuloksia, joiden perusteella jokaiselle fermentoinnin lopputuotteelle laskettiin standardiin verrattu aktiivisuusarvo. Tuloksissa oli nähtävissä, miten erilaiset olosuhteet vaikuttivat entsyymin aktiivisuuteen. Kaikkien saatujen tulosten perusteella on tehty MetGen Oy:lle ehdotus mitatun entsyymin aktiivisuusanalyysin standardiolosuhteista. Yritykselle on myös tehty ehdotus jatkomittausten suoritusta varten, jotta analyysistä saadaan mahdollisimman tarkkoja vertailuarvoja entsyymin tuleviin käyttöolosuhteisiin verrattuna.