Immunokemiallisen biosiruteknologian soveltuvuuden testaus ja alustava validointi kasvunedistäjien seulontaan lihamatriisista
Rinta-Harri, Kaisa (2017)
Rinta-Harri, Kaisa
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2017
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201801091151
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201801091151
Tiivistelmä
Kasvunedistäjät ovat lihantuotantoa tehostavia ja nopeuttavia aineita, kuten anabolisia steroideja, joilla on mahdollisia terveyshaittoja ihmiselle. Kasvunedistäjien käyttö lihantuotannossa on EU-lainsäädännöllä kielletty; EU:n sisämarkkinoilla niiden valvontavelvollisuus on aina lihantuottaja tai -maahantuojamaalla. Kasvunedistäjien käytön valvonnasta Suomessa vastaa Elintarviketurvallisuusvirasto Eviran vierasainevalvonta. Evira tarkkailee kasvunedistäjäjäämiä juomavedestä ja suoraan tuotantotiloilta saaduista virtsanäytteistä, mutta tällä hetkellä käytössä olevat menetelmät eivät täysin sovellu kasvunedistäjien seulontaan lihasta.
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli testata ja alustavasti validoida Eviran kemian yksikölle menetelmä kasvunedistäjien seulontaan lihamatriisista. Validoitu menetelmä oli Randox Laboratories’in kehittämä immunokemiallinen biosiruteknologia, joka perustuu kilpailevaan ELISA:an. Perinteisiin ELISA-menetelmiin verrattuna biosiruilla pystytään määrittämään saman aikaisesti yhdeksän eri analyytin pitoisuuksia näytteestä samanaikaisesti. Työn suorituksessa käytettiin Randoxin Growth Promoters Immunoaffinity Columns ja Growth Promoter Multiple Matrix Screen (GPMMS) -kittejä sekä Evidence Investigator -lukulaitetta, joilla esikäsiteltiin ja analysoitiin 22 lihaskudosnäytettä. Validoinnin parametreina käytettiin osoituskykyä, kynnysarvoa, Cut off -tasoa sekä saantoa.
Saatujen tulosten perustella todettiin, että menetelmä soveltuu boldenonin, zeranolin, deksametasonin, trenbolonin, raktopamiinin sekä stanozololin seulontaan lihamatriisista. Nandrolonin, klenbuterolin ja heksestrolin seulontaan menetelmä ei osoituskyvyn, Cut off -tason tai β-virheen puolesta sovellu. Kattavan validoinnin suorittamiseksi tulisi työtä jatkaa useammilla näytteillä, käyttäen nollanäytteinä todettuja negatiivisia näytteitä. Mittauksista tulisi suorittaa toistoja lyhyellä ja pitkällä aikavälillä, jotta voitaisiin luotettavasti todeta menetelmän toistettavuus ja uusittavuus.
Työn aikana huomattiin menetelmän olevan melko aikaa vievä ja työläs. Se ei täytä vaadittuja kriteerejä kaikkien analyyttien osalta, minkä lisäksi tutkittavien analyyttien joukosta puuttuu joitakin oleellisia aineita. Menetelmän testausta jatketaan uusilla näytteillä ennen päätöstä sen käyttöönotosta.
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli testata ja alustavasti validoida Eviran kemian yksikölle menetelmä kasvunedistäjien seulontaan lihamatriisista. Validoitu menetelmä oli Randox Laboratories’in kehittämä immunokemiallinen biosiruteknologia, joka perustuu kilpailevaan ELISA:an. Perinteisiin ELISA-menetelmiin verrattuna biosiruilla pystytään määrittämään saman aikaisesti yhdeksän eri analyytin pitoisuuksia näytteestä samanaikaisesti. Työn suorituksessa käytettiin Randoxin Growth Promoters Immunoaffinity Columns ja Growth Promoter Multiple Matrix Screen (GPMMS) -kittejä sekä Evidence Investigator -lukulaitetta, joilla esikäsiteltiin ja analysoitiin 22 lihaskudosnäytettä. Validoinnin parametreina käytettiin osoituskykyä, kynnysarvoa, Cut off -tasoa sekä saantoa.
Saatujen tulosten perustella todettiin, että menetelmä soveltuu boldenonin, zeranolin, deksametasonin, trenbolonin, raktopamiinin sekä stanozololin seulontaan lihamatriisista. Nandrolonin, klenbuterolin ja heksestrolin seulontaan menetelmä ei osoituskyvyn, Cut off -tason tai β-virheen puolesta sovellu. Kattavan validoinnin suorittamiseksi tulisi työtä jatkaa useammilla näytteillä, käyttäen nollanäytteinä todettuja negatiivisia näytteitä. Mittauksista tulisi suorittaa toistoja lyhyellä ja pitkällä aikavälillä, jotta voitaisiin luotettavasti todeta menetelmän toistettavuus ja uusittavuus.
Työn aikana huomattiin menetelmän olevan melko aikaa vievä ja työläs. Se ei täytä vaadittuja kriteerejä kaikkien analyyttien osalta, minkä lisäksi tutkittavien analyyttien joukosta puuttuu joitakin oleellisia aineita. Menetelmän testausta jatketaan uusilla näytteillä ennen päätöstä sen käyttöönotosta.