Valkosipulin lisäys ja virustestaus in vitro
Toivonen, Hanna (2011)
Toivonen, Hanna
Jyväskylän ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011060410945
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011060410945
Tiivistelmä
Opinnäytetyön tavoitteena oli lämpökäsitellyn valkosipuliaineiston virustestaus ja lisäys. Työ tehtiin Maa- ja elintarviketalouden tutkimuskeskuksessa (MTT) Laukaan toimipisteessä. MTT:ltä työn oli tilannut suomalainen viljelijä. Työn aineistona ollut virussaastunut valkosipulikanta puhdistettiin viruksista lämpökäsittelyllä. Puhdistettujen valkosipuleiden puhtaus testattiin ja pyrittiin löytämään paras lisäämismenetelmä puhdistetulle valkosipuliaineistolle. Työn tilannut viljelijä halusi saada kyseisen valkosipulikannan viruksettomia sipuleita aloittaakseen uudelleen kannan viljelyn.
Valkosipuliaineisto testattiin ELISA-testauksella (DAS- ja TAS-ELISA) sekä mehutestauksella. ELISA-testillä testattiin viruksia OYDV, LYSV, SLV, SYSV, GarCLV sekä alleksiviruksia. Mehutestauksella pyrittiin osoittamaan, että valkosipuliaineisto oli virussaastunut ennen aineiston puhdistusta.
Valkosipuliaineiston lisääminen toteutettiin varsikiekkomenetelmällä, jota MTT:llä ei ollut ennen kokeiltu. Varsikiekkolisäyksessä jokaisesta sipulista leikattiin ympyrän muotoinen kiekko mikroskoopin alla. Kiekko jaettiin neljään osaan ja saadut palat asetettiin mikroviljelypurkkeihin MS0-alustalle kehittymään.
ELISA-testin perusteella valkosipulin kasvupisteistä terveitä oli 80 % ja sairaita 20 %. ELISA-tulosten perusteella valkosipuliaineiston lämpökäsittely onnistui. Mehutestaus ei onnistunut, sillä viruksia ei saatu siirrostettua testikasveihin. Varsikiekkolisäys onnistui, koska sillä saatiin lisättyä valkosipuliaineistoa huomattavasti paremmin kuin aikaisemmin käytetyllä jakamismenetelmällä. Varsikiekkomenetelmä oli toimiva, mutta sitä tulisi testata lisää, jotta se voitaisiin ottaa käyttöön MTT Laukaan toimipisteessä.
Valkosipuliaineisto testattiin ELISA-testauksella (DAS- ja TAS-ELISA) sekä mehutestauksella. ELISA-testillä testattiin viruksia OYDV, LYSV, SLV, SYSV, GarCLV sekä alleksiviruksia. Mehutestauksella pyrittiin osoittamaan, että valkosipuliaineisto oli virussaastunut ennen aineiston puhdistusta.
Valkosipuliaineiston lisääminen toteutettiin varsikiekkomenetelmällä, jota MTT:llä ei ollut ennen kokeiltu. Varsikiekkolisäyksessä jokaisesta sipulista leikattiin ympyrän muotoinen kiekko mikroskoopin alla. Kiekko jaettiin neljään osaan ja saadut palat asetettiin mikroviljelypurkkeihin MS0-alustalle kehittymään.
ELISA-testin perusteella valkosipulin kasvupisteistä terveitä oli 80 % ja sairaita 20 %. ELISA-tulosten perusteella valkosipuliaineiston lämpökäsittely onnistui. Mehutestaus ei onnistunut, sillä viruksia ei saatu siirrostettua testikasveihin. Varsikiekkolisäys onnistui, koska sillä saatiin lisättyä valkosipuliaineistoa huomattavasti paremmin kuin aikaisemmin käytetyllä jakamismenetelmällä. Varsikiekkomenetelmä oli toimiva, mutta sitä tulisi testata lisää, jotta se voitaisiin ottaa käyttöön MTT Laukaan toimipisteessä.