Virusvasta-aineiden seulonta synteettisistä vasta-ainekirjastoista
Laanti, Mervi (2011)
Laanti, Mervi
Turun ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011061512151
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011061512151
Tiivistelmä
Coxsackievirus A7 (CAV7) ja coxsackievirus A9 (CAV9) ovat molemmat pikornaviruksiin kuuluvia, ihmiselle tautia aiheuttavia enteroviruksia. CAV7 on aiheuttanut muun muassa. aivokalvontulehdusta ja halvausepidemioita, mutta on nykyisin melko harvinainen. CAV9 on yleinen ihmispatogeeni, joka aiheuttaa lievien hengitystieinfektioiden lisäksi muun muassa sydänlihas- ja aivokalvontulehduksia.
Tämän työn tarkoituksena oli optimoida enterovirusten puhdistusmenetelmää ja tarkastella viruksen saantoa puhdistuksen eri vaiheissa sekä käyttää puhdistettuja viruksia faagi-vasta-aineiden seulonnassa synteettisistä scFv-kirjastoista.
Viruspuhdistuksessa sovellettiin ultrasuodatusta viruksen osittaiseen puhdistukseen ja konsentrointiin perinteisemmän PEG-saostuksen ja CsCl-gradienttiajon rinnalla. Puhdistuksen eri vaiheista kerättiin näytteitä, joiden infektiivisyys määritettiin soluilla ja puhtaus geelillä. Saatujen tulosten perusteella havaittiin, että ultrasuodatus nopeuttaa viruspuhdistusprosessia, kun tarvitaan mahdollisimman infektiivistä viruspreparaattia ja virus on suhteellisen puhdasta ultrasuodatuksen jälkeen.
Vasta-aineseulonnassa CAV9:lle ei onnistuttu löytää hyviä sitojia vasta-ainekirjastosta, jolloin päätettiin muutamien selektioiden jälkeen keskittyä ainoastaan CAV7:aan. CAV7:lle löydettiin muutamia hyviä sitojia, joita voisi jatkossa rikastaa uusilla pännäyskierroksilla. CAV7:lle löydettyjä sitojia voisi puhdistaa vasta-aineen testauksia varten. Pikornavirusvasta-aineita voitaisiin ylipäänsä testata elävissä soluissa in vitro tai hiirissä in vivo, muun muassa neutralisaatiotesteillä ja kokeilla siten virusinfektion estoa. Humaanivasta-ainekirjastot mahdollistavat virusvasta-aineiden käytön myös ihmisissä.
Tämän työn tarkoituksena oli optimoida enterovirusten puhdistusmenetelmää ja tarkastella viruksen saantoa puhdistuksen eri vaiheissa sekä käyttää puhdistettuja viruksia faagi-vasta-aineiden seulonnassa synteettisistä scFv-kirjastoista.
Viruspuhdistuksessa sovellettiin ultrasuodatusta viruksen osittaiseen puhdistukseen ja konsentrointiin perinteisemmän PEG-saostuksen ja CsCl-gradienttiajon rinnalla. Puhdistuksen eri vaiheista kerättiin näytteitä, joiden infektiivisyys määritettiin soluilla ja puhtaus geelillä. Saatujen tulosten perusteella havaittiin, että ultrasuodatus nopeuttaa viruspuhdistusprosessia, kun tarvitaan mahdollisimman infektiivistä viruspreparaattia ja virus on suhteellisen puhdasta ultrasuodatuksen jälkeen.
Vasta-aineseulonnassa CAV9:lle ei onnistuttu löytää hyviä sitojia vasta-ainekirjastosta, jolloin päätettiin muutamien selektioiden jälkeen keskittyä ainoastaan CAV7:aan. CAV7:lle löydettiin muutamia hyviä sitojia, joita voisi jatkossa rikastaa uusilla pännäyskierroksilla. CAV7:lle löydettyjä sitojia voisi puhdistaa vasta-aineen testauksia varten. Pikornavirusvasta-aineita voitaisiin ylipäänsä testata elävissä soluissa in vitro tai hiirissä in vivo, muun muassa neutralisaatiotesteillä ja kokeilla siten virusinfektion estoa. Humaanivasta-ainekirjastot mahdollistavat virusvasta-aineiden käytön myös ihmisissä.