Large scale amplification and purification of replication competent vaccinia virus
Vallius, Suvi (2012)
Vallius, Suvi
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112516345
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112516345
Tiivistelmä
Tein opinnäytetyöni Helsingin Yliopiston Cancer Gene Therapy Group-tutkimusryhmälle. Työni päätavoitteena oli tuottaa tiettyä vaccinia-virusta (vvD-GFP) tulevia tutkimuksia varten sekä kuvata tuotantoprosessin eri työvaiheet. Soluviljelyssä käytettävän seerumin (FBS) ongelmallisuuden vuoksi, tavoitteenani oli myös selvittää vaikuttaako seerumiton kasvatusliuos A549-solujen elinkykyyn sekä selvittää, onko vaccinia-virusta mahdollista tuottaa ilman seerumin käyttöä. Luotettavan virustitterin saamiseksi, tavoitteenani oli lisäksi tehdä virustitterin määritys kahdella eri menetelmällä, plakki- ja TCID50-menetelmällä, sekä verrata niistä saatuja tuloksia keskenään. Tein vaccinia-viruksesta kaksi virusvalmistetta. Toisen valmisteen tuotin seerumittomassa soluviljelmässä ja toisen 2 % seerumia sisältävässä soluviljelmässä. Viruksen GFP-transgeenin osoitin fluoresenssimikroskoopin avulla. Kasvatin A549-soluja sekä seerumittomassa että 10 % seerumia sisältävässä kasvatusliuoksessa ja mittasin solujen elinkykyä kolmena peräkkäisenä päivänä MTS-analyysillä. Vertasin saamiani tuloksia keskenään ja havainnollistin tuloksia taulukon avulla. Määritin virustitterit molemmista valmisteista kahdella eri titteröinti menetelmällä ja vertasin tuloksia keskenään sekä arvioin menetelmien luotettavuutta. Tulosten mukaan vaccinia-virusta (vvD-GFP) oli mahdollista tuottaa A549-soluissa seerumittomassa viljelmässä ilman merkittävää virustitterin laskua. Seerumittomassa soluviljelmässä tuotetun virusvalmisteen titteri oli noin 12 % pienempi kuin tavallisessa, seerumia sisältävässä, viljelmässä. A549-solujen viljely seerumittomassa kasvatusliuoksessa oli mahdollista ainakin lyhyen aikaa, mutta solut eivät kasvaneet siinä yhtä tehokkaasti. Virustittereissä kahden eri menetelmän välillä esiintyi eroja.