Hinkuyskän serologiseen diagnostiikkaan tar-koitettujen PT-antigeenia sisältävien ELISA-kittien vertailu
Peltomaa, Suvi (2014)
Peltomaa, Suvi
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014101514768
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014101514768
Tiivistelmä
Hinkuyskä on gramnegatiivisen Bordetella pertussis -bakteerin aiheuttama hengitystieinfektio, jonka oireina ovat voimakas puuskittainen yskä ja vinkuva ääni yskiessä. Hinkuyskä leviää tehokkaasti pisaratartuntana. Tautia vastaan on rokote, mutta siitä huolimatta tautia esiintyy kaikenikäisillä. Hinkuyskä esiintyy lievempänä muotona aikuisilla ja vanhemmilla lapsilla, mutta rokottamattomille lapsille se on hengenvaarallinen.
Hinkuyskää voidaan laboratoriossa diagnosoida kolmella menetelmällä: viljelyllä, PCR:lla ja serologisesti. Näistä viljely ja PCR ovat käyttökelpoisimpia taudin alkuvaiheessa, kun taas serologia toimii parhaiten oireiden kestettyä pidempään. Serologiassa määritetään bakteeriantigeenin, kuten pintarakenteen tai virulenssitekijän, aikaansaamaa vasta-aineen pitoisuuden nousua veressä.
Hinkuyskän serologiassa käytetään yleisesti ELISA-menetelmää, jossa aikaisemmin on yleensä käytetty antigeenina bakteerisolusonikaattia. Eurooppalainen työryhmä ECDC on kuitenkin suositellut, että antigeenina käytettäisiin puhdistettua pertussistoksiinia (PT), joka on B. pertussis –bakteerille spesifinen proteiini.
Opinnäytetyö toteutettiin Yhtyneet Medix Laboratorion toimeksiannosta. Tarkoituksena oli testata ja verrata kaupallisia pertussistoksiinia sisältäviä ELISA-kittejä, jotta YML:ssä voitaisiin siirtyä ECDC:n suosituksen mukaiseen menetelmään. Työssä testattiin kolmea IgG-kittiä ja kahta IgA-kittiä. Tutkimuksessa käytettiin näytteinä vanhoja potilasnäytteitä, ulkoisia laaduntarkkailunäytteitä sekä WHO:n referenssinäytettä.
Kiteille määritettiin spesifisyys, sensitiivisyys ja kokonaisvariaatio sekä arvioitiin tulosten oikeellisuutta referenssinäytteen avulla. Tulosten perusteella YML:ssa päädyttiin ottamaan yhden valmistajan IgG- ja IgA-kitit käyttöön ja lisätestaukseen.
Hinkuyskää voidaan laboratoriossa diagnosoida kolmella menetelmällä: viljelyllä, PCR:lla ja serologisesti. Näistä viljely ja PCR ovat käyttökelpoisimpia taudin alkuvaiheessa, kun taas serologia toimii parhaiten oireiden kestettyä pidempään. Serologiassa määritetään bakteeriantigeenin, kuten pintarakenteen tai virulenssitekijän, aikaansaamaa vasta-aineen pitoisuuden nousua veressä.
Hinkuyskän serologiassa käytetään yleisesti ELISA-menetelmää, jossa aikaisemmin on yleensä käytetty antigeenina bakteerisolusonikaattia. Eurooppalainen työryhmä ECDC on kuitenkin suositellut, että antigeenina käytettäisiin puhdistettua pertussistoksiinia (PT), joka on B. pertussis –bakteerille spesifinen proteiini.
Opinnäytetyö toteutettiin Yhtyneet Medix Laboratorion toimeksiannosta. Tarkoituksena oli testata ja verrata kaupallisia pertussistoksiinia sisältäviä ELISA-kittejä, jotta YML:ssä voitaisiin siirtyä ECDC:n suosituksen mukaiseen menetelmään. Työssä testattiin kolmea IgG-kittiä ja kahta IgA-kittiä. Tutkimuksessa käytettiin näytteinä vanhoja potilasnäytteitä, ulkoisia laaduntarkkailunäytteitä sekä WHO:n referenssinäytettä.
Kiteille määritettiin spesifisyys, sensitiivisyys ja kokonaisvariaatio sekä arvioitiin tulosten oikeellisuutta referenssinäytteen avulla. Tulosten perusteella YML:ssa päädyttiin ottamaan yhden valmistajan IgG- ja IgA-kitit käyttöön ja lisätestaukseen.