In-House Immunospot -menetelmän detektiotavan kehittämisprojekti

Abstract

HYKS:n Iho- ja allergiasairaalan allergeenilaboratoriolla on ainoana Suomessa käytössä Immunospot-tutkimus, jolla voidaan osoittaa potilaan IgE-välitteinen herkistyminen potilaan omalle allergeeninäytteelle. IgE-välitteisessä allergiassa allergeeni on usein proteiini, johon IgE sitoutuu aiheuttaen allergisen reaktion, jonka oireet voivat olla moninaisia ja vaihdella lievistä paikallisoireista jopa anafylaksiaan.

Opinnäytetyö on osa menetelmän detektiotavan kehittämisprojektia, jonka tarkoituksena on selvittää, saadaanko kemiluminesenssi- tai fluoresenssimenetelmällä saman tasoisia tai jopa parempia tuloksia kuin tällä hetkellä käytössä olevalla radiologisella menetelmällä. Menetelmävaihdoksella saavutettaisiin taloudellista hyötyä ja analyysiin käytettävä aika lyhenisi samalla kun tuloksen vastausaika potilaalle lyhenisi. Opinnäytetyössä suoritettiin Immunospot-tutkimus viidellä maapähkinäpositiivisilla seerumipoolilla, joiden IgE pitoisuus tiedettiin. Kemiluminesenssi- ja fluoresenssimenetelmiin käytettiin koivuseerumin laimennoksia, joiden IgE pitoisuus tiedettiin ja jotka olivat samaa tasoa kuin maapähkinäpoolien.

Tuloksista voitiin havaita, että uudet menetelmät ovat tulevaisuudessa mahdollisia toteuttaa mutta vaativat optimointia ennen diagnostista käyttöönottoa. Radioaktiiviseen mittaamiseen perustuvalla Immunospot-tutkimuksella saatiin tuloksia, jotka vastasivat tiedettyjä IgE pitoisuuksia. Sen sijaan kemiluminesenssi- tai fluoresenssimenetelmillä ei saatu tässä työssä tehdyissä tutkimuksissa luotettavia tuloksia.

Opinnäytetyö on toteutettu yhteistyössä HYKS:n Iho- ja allergiasairaalan allergeenilaboratorion kanssa.

Allergen Laboratory in the Skin and Allergy Hospital, Helsinki University Central Hospital is the only service laboratory offering a custom in vitro IgE diagnostic method Immunospot in Finland. Immunospot can be used to identify IgE mediated sensitization to a patient’s own allergen sample. Allergens are usually proteins that bind IgE on the surface of the effector cells to activate an allergic response. Symptoms can be manifold and changing from mild local symptoms to anaphylaxis.

This thesis is part of a development project aiming at enhanced detection of the in-house Immunospot method. The aim was to resolve whether we get same results with chemiluminescence or fluorescence method than the radiology method currently in use. The change of method can result in monetary gain and quicker analysis time. At the same we can get the results faster to the patients. In this thesis we executed Immunospot detections with five peanut positive serum pools which known IgE amounts. Five different birch pollen positive serum dilutions were chosen to be used in chemiluminescence- and fluorescence methods which known IgE amounts at the same level as peanut serum pools.

The results show that both chemiluminescence- and fluorescence methods are possible in the future but need optimization before diagnostic use. The results gained with Immunospot matched with commercial IgE measurements. Instead, the chemiluminescence- and fluorescence methods didn’t result in trustworthy outcome.

Thesis is done in co-operation with Skin and Allergy Hospital’s Allergen Laboratory.