OGG1-korjausentsyymin paikantaminen karsinogeenisestä rintakudoksesta polymeeritekniikalla

Abstract

Opinnäytetyömme aiheena on OGG1-korjausentsyymin (8-oxoguaniini-glykosylaasi) paikantaminen rintasyöpäkudoksista valmistetuista histologisista kudosleikkeistä. Tutkimus tehdään Oulun yliopistollisen sairaalan patologian laitokselle. Suoritamme värjäyksen NovolinkTM-polymeeritekniikan menetelmän mukaan. Polymeeritekniikkaan perustuvia menetelmiä on kahdenlaisia. Käyttämässämme EnvisionTM-menetelmässä käytetään sekundaarivasta-ainetta, joka on spesifinen hiiren ja kanin anti-IgM-vasta-aineille. Tavoitteenamme oli selvittää optimaalisin vasta-ainelaimennos, kudoksen esikäsittely ja vasta-aineen inkubaatioaika. OGG1-entsyymi on spesifinen 8-OH-G-mutaatioita DNA:sta pois leikkaava DNA-korjausentsyymi, jota OGG1-geeni tuottaa. Ihmissolussa OGG1-geeni sijaitsee kro-mosomissa 3p25 ja koodaa OGG1-entsyymin kahta erilaista muotoa, jotka ovat α-OGG1 ja β-OGG1. OGG1-korjausentsyymin paikantaminen polymeeritekniikalla onnistuu suhteellisen hyvin, mutta vaatii vielä lisää kokeilukertoja. Oulun yliopistollisen sairaalan patologian laitoksella parhaat värjäystulokset saatiin, kun vasta-ainelaimennos oli 1/500 ja inkubaatioaika 24 tuntia. Lupaavat tutkimustulokset antavat aihetta olettaa, että OGG1-korjausentsyymin paikantaminen polymeeritekniikan avulla voidaan lähitule-vaisuudessa ottaa rutiinikäyttöön immunohistokemian laboratoriossa. Suoritettuamme oman osuutemme laboratoriotöistä huomasimme useita jatkotutkimusmahdollisuuksia: värjäyksissä voi-si kokeilla esikäsittelynä inkubointia trypsiiniliuoksella nyt käyttämämme pepsiiniliuoksen sijaan. Myös 12 tunnin inkubaatioaikaa kannattaisi kokeilla, koska ongelmana oli useasti liiallinen tausta-värjäytyminen, joka voi mahdollisesti johtua pitkästä inkubaatioajasta. Tutkimusryhmän aloitta-maa tutkimusta on jo jatkettu Oulun yliopiston patologian laboratoriossa.

The topic of our thesis is localization of the OGG1-repair enzyme (8-oxoguanine-glycosylase) on carsinogenic breast tissues with polymer technique. The research was done for the Department of Pathology of Oulu University Hospital. We perform the OGG1-repair enzyme localization with NovolinkTM-polymer technique. There are two polymer-based techniques. We used EnvisionTM-technique which utilizes secondary antibody. Our aim was to find out the optimal antibody dilution, tissue prehandling and incubation time of the antibody. OGG1 enzyme produced by OGG -gene is a specific enzyme that removes 8-OH-G-mutation from the DNA. In human cells OGG1 gene is localized in chromosome 3p25 which encodes two different types of OGG1 enzyme; α-OGG1 and β-OGG1. We succeeded in the localization of OGG1-repair enzyme with polymer technique quite well. But it still needs more testing. We got our best localization results with 1/500 antibody dilution and 24 hours incubation time. Promising test results give hope to assume that the localization of OGG1-repair enzyme with polymer technique can be taken for routine use in immunohistochemical la-boratories in the near future. After our part of the research was done, we discovered many possi-bilities for further testing; for example prehandling with trypsine and 12 hours incubation time. The research that we started has already been continued in Oulu University Department of Pathology.