a2b1-INTEGRIINISPESIFISTEN ENDOSOMAALISTEN RAKENTEIDEN ERISTYS

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Jyväskylän yliopistossa, echovirus 1:tä tutkivassa tutkimusryhmässä. Opinnäytetyön tarkoituksena oli kehittää menetelmä, jossa a2b1-integriini-spesifisiä endosomaalisia rakenteita saataisiin eristettyä solun muista kalvorakenteista. Menetelmän avulla endosytoosireitin rakenteita pystytään karakterisoimaan paremmin.

Solujen fraktiointi sekä soluelinten eristäminen on biokemiassa nykyään paljon esillä. Eristämiseen käytettävät menettelytavat ovat kuitenkin melko uusia ja niitä on kehitetty vasta 60-luvulta lähtien. Tämän vuoksi aikaisempia tutkimuksia aiheesta ei ole paljoakaan saatavilla. Eristäminen on kuitenkin biokemiassa tärkeää, sillä puhtaista ja eristetyistä rakenteista pystytään tutkimaan paremmin niiden sisältämiä proteiineja ja lipidejä, ja tätä kautta löytämään mahdollisesti kokonaan uusia ominaisuuksia niiden rakenteille.

Tutkimuksessa a2b1-integriini-spesifisiä endosomaalisia rakenteita eristettiin sakkaroosigradientin avulla. Tutkimusta varten tuotettiin, puhdistettiin ja biotinyloitiin a2-vasta-ainetta. Kokeet tehtiin SAOS-soluilla. a2b1 -integriinin soluun sisäänmeno indusoitiin sitomalla solun pinnan a2b1-integriineihin biotinyloitua hiiren anti-integriini a2-vasta-ainetta. Ja tämän jälkeen soluille sidottiin streptavidiinilla päällystetyt polystyreeni helmet. Gradientista syntynyt fraktio sisälsi puhdistettuja, eristettyjä solunsisäisiä rakenteita.

Menetelmä, jolla koe suoritettiin, oli onnistunut. a2b1-integriini-spesifisiset endosomaaliset rakenteet saatiin eristettyä melko puhtaasti. Kokeessa syntyneistä tuloksista saatiin arvokasta tietoa jatkotutkimuksia ajatellen, ja niitä voidaan hyödyntää myöhemmissä kokeissa.

The bachelor’s thesis was done at the University of Jyväskylä in a research group which is doing research with Echovirus 1 (EV1). The aim of the bachelor’s thesis was to develop a method to isolate a2b1 integrin-specific endosomal structures of other membrane structures. By the help of this method the structures of endosytosis route can be characterized better.

Nowadays fractionation of cells and isolation of cell bodies is much discussed in biochemistry. Isolation procedures are fairly new and have been developed since the 60s. Because of that there is not that many previous research results available. Lipids and proteins contained in structures are easier to research when they are pure and isolated. That is why isolation is important in biochemistry. By that way it might be possible to find new features in those structures.

In the research a2b1 integrin-specific endosomal structures were isolated by the saccarose gradient. For the study a2-antibody was produced, purified and biotinylated. The tests were made by SAOS-cells. The cell entry of a2b1-integrin was induced by binding to the cell surface integrins a2b1-biotinylated mouse antiintegrin a2-antibody. After that streptavidin-coated polystyrene beads were bound to the cells. The fraction formed by the gradient included purified, isolated intracellular structures.

The method was successful. The a2b1-integrin spesific endosomal structures were isolated relatively pure. The method gives valuable information for further investigation and the results can be used in subsequent experiments.