Kiinteäydinkolonnin käyttö lääkeaineiden määrityksessä

Abstract

Tämän opinnäytetyön tavoitteena oli tutkia uudenlaisen kolonnityypin, kiinteäydinkolonnin, käyttöä lääkeainemäärityksissä. Kiinteäydinkolonnin sanotaan nopeuttavan analyyseja ja sen avulla saatavan parempia ja tarkempia tuloksia. Kiinteäydinkolonnin partikkelit ovat erilaisia kuin perinteisissä nestekromatografian kolonneissa, ja se mahdollistaa parannukset vanhoihin menetelmiin.

Tässä opinnäytetyössä tutkittiin kiinteäydinkolonnin käyttöä kahdessa erilaisessa analyysissa. Ensimmäinen analyysi oli seulonta, jossa saatiin selville minkälaisia bentsodiatsepiineja, opioideja ja niiden kaltaisia yhdisteitä potilas on syönyt esimerkiksi myrkytystapauksissa. Tämän analyysin osalta keskityttiin testaamaan vain ajo-olosuhteita.

Toinen analyysi koski epilepsialääkkeinä käytettyjen antikonvulsanttien määritystä seerumista. Tämän analyysin osalta testattiin ensin ajo-olosuhteita, jonka jälkeen menetelmä validoitiin. Validoitavia parametreja olivat täsmällisyys, toteamis- ja määritysraja, spesifisyys ja selektiivisyys, häiriöalttius, herkkyys, tarkkuus, mittausepävarmuus ja näytteiden säilyvyys näytteensyöttäjässä.

Bentsodiatsepiinien, opioidien ja niiden kaltaisten yhdisteiden kohdalla menetelmä todettiin toimivaksi, jos analyysi saadaan tehtyä samana päivänä kuin näytteet on uutettu. Jotkut yhdisteet alkoivat hajota aina enemmän mitä pidempään ne olivat liuotettuna ajoliuokseen. Tämän epäiltiin johtuvan ajoliuoksen happamuudesta.

Antikonvulsanttien osalta validointi onnistui hyvin, muutkin menetelmälle asetetut tavoitteet saavutettiin. Näitä olivat ajoajan lyheneminen, piikkien symmetrisyys ja yhdisteiden erottuminen pohjaviivaan asti. Ajoaikaa saatiin lyhennettyä jopa puoleen entisestä, mikä on nopeuttanut analyysia huomattavasti.

The objective of this thesis was to see if a new kind of liquid chromatography column would suit the determination of different kind of drugs. This column represents core-shell technology which is said to speed up the analysis and to bring in better and more accurate results. In core-shell technology the particles are different from those in conventional liq-uid chromatography columns, and it brings improvements to the old methods.

This thesis investigated the use of a core-shell column in two different analyses of differ-ent kinds of drugs. The first analysis was a screening, which determines what kind of ben-zodiazepine, opioids and compounds similar to those the patient has taken for example in overdose cases. This analysis focused on testing only the conditions for analysis.

The second analysis concerned the antiepileptic drugs called anticonvulsants and their determination in serum. First the conditions of analysis were tested and after that the method was validated. The validated parameters were accuracy, detection and quantifica-tion limits, specificity and selectivity, ruggedness, sensitivity, accuracy, measurement un-certainty and the stability of the samples in the sampler.

For benzodiazepines, opioids and similar compounds the method was found to work, if the analysis is done on the same day as the samples are extracted. Some of the compounds began to decompose the longer they were dissolved in mobile phase. This is suspected to be due to mobile phase acidity.

The validation for anticonvulsants was successful and the other goals set to method were achieved. These were the shortening of runtime, peak symmetry and base-line separation. The analyzing time was shortened by up to half from the former, which speeds up the analysis considerably.