Syanobakteerien bioaktiivisten yhdisteiden puhdistus nestekromatografisesti
Keinänen, Nina (2013)
Keinänen, Nina
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201301141405
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201301141405
Tiivistelmä
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli kasvattaa syanobakteerikantoja, joiden on todettu tuottavan bioaktiivisia yhdisteitä, ja optimoida näiden yhdisteiden puhdistusmenetelmiä. Tavoitteena oli löytää sellaiset parametrit, joilla yhdisteet erottuvat hyvin eivätkä retentioajat kasva liian suuriksi. Tutkimukset koostuivat syanobakteerikantojen kasvatuksesta, biomassasta tehtyjen uutteiden nestekromatografisista määrityksistä ja yhdisteiden puhdistuksesta.
Aluksi UK2a1m1 -kantaa kasvatettiin Z8 -alustalla kolmen viikon ajan, jonka jälkeen solut kerättiin talteen ja pakastettiin. XPORK 5A -kannan solut saatiin valmiiksi kuivattuina yliopiston kantakokoelmasta. Kuivatut solut uutettiin metanolilla ja hajotettiin homogenisaattorilla. Liuos sentrifugoitiin, jonka jälkeen kirkas faasi kuivattiin paineilmalla. Syke 748A- ja FSN -kantojen solut olivat valmiiksi esikäsiteltyjä. Kuivatut näytteet liuotettiin eluenttiin ja ajettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografilla. Ajo-olosuhteita muutettiin sen mukaan, miten hyvin piikit erottuivat toisistaan.
Yhdisteiden retentioajat saatiin optimoitua välille 7.2 – 22.0 min ja piikit erottuivat hyvin. Epäpuhtauksia tarkasteltiin 3D -kuvaajan avulla. Osa epäpuhtauksista eluoitui samaan aikaan yhdisteen kanssa, eikä niitä kaikkia saatu täydellisesti puhdistettua. Todettiin, että kuivattuja soluja olisi tullut punnita uuttoa varten enemmän, sillä yhdistettä ei saatu puhdistettua riittävästi LC-UV-MS -analyysiä varten.
Aluksi UK2a1m1 -kantaa kasvatettiin Z8 -alustalla kolmen viikon ajan, jonka jälkeen solut kerättiin talteen ja pakastettiin. XPORK 5A -kannan solut saatiin valmiiksi kuivattuina yliopiston kantakokoelmasta. Kuivatut solut uutettiin metanolilla ja hajotettiin homogenisaattorilla. Liuos sentrifugoitiin, jonka jälkeen kirkas faasi kuivattiin paineilmalla. Syke 748A- ja FSN -kantojen solut olivat valmiiksi esikäsiteltyjä. Kuivatut näytteet liuotettiin eluenttiin ja ajettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografilla. Ajo-olosuhteita muutettiin sen mukaan, miten hyvin piikit erottuivat toisistaan.
Yhdisteiden retentioajat saatiin optimoitua välille 7.2 – 22.0 min ja piikit erottuivat hyvin. Epäpuhtauksia tarkasteltiin 3D -kuvaajan avulla. Osa epäpuhtauksista eluoitui samaan aikaan yhdisteen kanssa, eikä niitä kaikkia saatu täydellisesti puhdistettua. Todettiin, että kuivattuja soluja olisi tullut punnita uuttoa varten enemmän, sillä yhdistettä ei saatu puhdistettua riittävästi LC-UV-MS -analyysiä varten.