Metisilliiniresistentin Staphylococcus aureus (MRSA) -bakteerin seulontamenetelmän validointi

Abstract

Tämä työ tehtiin Elintarviketurvallisuusvirasto Eviran antibioottiresistenssilaboratoriolle. Opinnäytetyön tavoitteena oli validoida metisilliiniresistentin Staphylococcus aureus (MRSA) -bakteerin seulontamenetelmä sian sierainlimanäytteille. Menetelmä on Euroopan yhteisön referenssilaboratorion ohjeen ’Laboratory protocols, Isolation of MRSA from dust samples’ 2nd Ed 2009 mukainen. Menetelmä on kvalitatiivinen. Validoinnin suureina olivat toteamisraja, uusittavuus ja toistettavuus, sensitiivisyys ja spesifisyys sekä virhenegatiivi-suus ja -positiivisuus.

Validoinnissa siirrostettiin, siansierainlimanäytetikkuihin keinotekoisesti kolmea eri pitoisuut-ta MRSA -bakteeria. MRSA -maljalla kasvavat tyypilliset pesäkkeet varmennettiin PBP´2-testillä sekä PCR:llä. Lisäksi tutkittiin kahdeksan vertailututkimusnäytettä sekä kaksikym-mentä rutiininäytettä.

Kaikissa siirrostetuissa näytteissä todettiin MRSA -bakteeri lukuun ottamatta kahta näytettä, joihin siirrostettu bakteerimäärä oli 100 pmy ja 1000 pmy. Uusittavuus ja toistettavuus olivat yhteneväisiä kahden laborantin kesken. Virhepositiivisia ei ollut ja virhenegatiivisia oli kaksi. Vertailututkimusnäytteiden tuloksissa oli yksi virhenegatiivinen. Tulosten mukaan. mene-telmä soveltuu MRSA -bakteerin seulontaan sian sierainlimanäytteistä.

This Bachelor’s thesis was carried out for the Antibiotic Resistant Laboratory of Finnish Food Safety Authority Evira. The purpose of the study was to validate the screening meth-od of the methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) from pig nasal swab sam-ples. The method followed the guidelines of the European Community reference laboratory manual ' Laboratory protocols, Isolation of MRSA from dust samples”2nd Ed 2009. The method is qualitative. The specifications of the validation were the detection limit, reproduc-ibility and repeatability, sensitivity and specificity, as well as false positivity and negativity.

For this validation the nasal swabs were artificially inoculated with three different inoculation levels of MRSA. The samples were cultured according the protocol. Typical colonies were confirmed by PBP'2 -test and PCR. In addition, eight reference samples and twenty routine nasal swab samples were examined.

MRSA was found in all of the inoculated swab samples, except for two samples. These samples were inoculated with the bacterial count of 100 cfu and 1000 cfu. Reproducibility and repeatability were similar between the two laboratory technicians. There were two false negative samples and no false positive samples. There was one false negative sam-ple among the reference samples. On the basis of the results the method is suitable for screening of MRSA from pig nasal swab samples