PT-Moduli immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyssä
Manninen, Juha (2014)
Manninen, Juha
Tampereen ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014102915048
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014102915048
Tiivistelmä
Moderni patologia hyödyntää immunohistokemiaa kasvainten tunnistamisessa ja luokittelussa. Solutasolla tapahtuvissa reaktioissa pystytään osoittamaan yksittäisiä antigeeneja, joiden esiintyminen voi vaikuttaa hoidon suunnitteluun. Immunohistokemialliset värjäykset perustuvat vasta-aineiden kykyyn sitoutua spesifisesti omaan antigeeniinsa. Muodostuneet vasta-aine-antigeeni-kompleksit pystytään osoittamaan erilaisilla leimausmenetelmillä ja väriaineilla, eli kromogeeneilla. Tässä työssä käytetyn immunohistokemiallisen värjäyksen detektio perustuu piparjuuren peroksidaasientsyymin ja 3,3’diaminobentsidiinin reaktiossa syntyvään ruskeaan väriin.
PT-Moduli on immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyyn tarkoitettu laite, jolla pystytään palauttamaan formaliinifiksaation aikana kudoskappaleiden ja solujen pinnalla tapahtuneita muutoksia. Muutosten palauttaminen (antigen retrieval) on immunohistokemiallisen värjäyksen onnistumisen kannalta tärkeää, koska formaliinifiksaation aikana kudosrakenteisiin syntyneet metyleenisillat heikentävät kudosten antigeenisyyttä merkittävästi. Korkean lämpötilan esikäsittelyn aikana kudosleikkeet kuumennetaan sopivassa puskuriliuoksessa lähelle kiehumispistettä.
Tämän opinnäytetyön tarkoitus on kokeilla voidaanko PT-Modulia käyttää immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyssä mikroaaltouunin rinnalla. Keski-Suomen keskussairaalan patologian yksikössä immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyt on optimoitu laboratoriokäyttöön soveltuvalle mikroaaltouunille. Mikroaaltouunissa voidaan tehdä vain yksi esikäsittely kerrallaan, kun PT-Moduli puolestaan tarjoaa mahdollisuuden kahteen samanaikaiseen esikäsittelyyn. Verrattaessa PT-Modulia mikroaaltouunitekniikkaan skotlantilainen tutkimusryhmä on osoittanut PT-Modulin käytön eduiksi esikäsittelyn nopeutumisen, vähäisemmät vahingot kudosleikkeille esikäsittelyn aikana ja mahdollisuuden käyttää suurempia vasta-ainelaimennoksia.
Työn tuloksena PT-Modulin havaittiin soveltuvan immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyyn vasta-ainekohtaisten optimointien jälkeen. Osa kokeilluista 61 vasta-aineesta antoi hyviä värjäystuloksia käytetyissä esikäsittelyolosuhteissa, mutta suurin osa vaatii optimointia esikäsittelyajan ja vasta-ainelaimennoksen osalta.
PT-Moduli on immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyyn tarkoitettu laite, jolla pystytään palauttamaan formaliinifiksaation aikana kudoskappaleiden ja solujen pinnalla tapahtuneita muutoksia. Muutosten palauttaminen (antigen retrieval) on immunohistokemiallisen värjäyksen onnistumisen kannalta tärkeää, koska formaliinifiksaation aikana kudosrakenteisiin syntyneet metyleenisillat heikentävät kudosten antigeenisyyttä merkittävästi. Korkean lämpötilan esikäsittelyn aikana kudosleikkeet kuumennetaan sopivassa puskuriliuoksessa lähelle kiehumispistettä.
Tämän opinnäytetyön tarkoitus on kokeilla voidaanko PT-Modulia käyttää immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyssä mikroaaltouunin rinnalla. Keski-Suomen keskussairaalan patologian yksikössä immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyt on optimoitu laboratoriokäyttöön soveltuvalle mikroaaltouunille. Mikroaaltouunissa voidaan tehdä vain yksi esikäsittely kerrallaan, kun PT-Moduli puolestaan tarjoaa mahdollisuuden kahteen samanaikaiseen esikäsittelyyn. Verrattaessa PT-Modulia mikroaaltouunitekniikkaan skotlantilainen tutkimusryhmä on osoittanut PT-Modulin käytön eduiksi esikäsittelyn nopeutumisen, vähäisemmät vahingot kudosleikkeille esikäsittelyn aikana ja mahdollisuuden käyttää suurempia vasta-ainelaimennoksia.
Työn tuloksena PT-Modulin havaittiin soveltuvan immunohistokemiallisten näytteiden esikäsittelyyn vasta-ainekohtaisten optimointien jälkeen. Osa kokeilluista 61 vasta-aineesta antoi hyviä värjäystuloksia käytetyissä esikäsittelyolosuhteissa, mutta suurin osa vaatii optimointia esikäsittelyajan ja vasta-ainelaimennoksen osalta.