Lääkevalmisteen HPLC-analyysimenetelmän kehitys ja validointi

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Hämeenlinnassa sijaitsevan Vitabalans Oy:n laboratoriossa. Vitabalans Oy on suomalainen lääkkeitä, lisäravinteita, lääkinnällisiä laitteita sekä eläinten täydennysrehuja ja hoitotarvikkeita valmistava yritys. Laboratoriossa tehdään laadunvalvonta-analyysejä sekä tuotekehitystä.

Vaikuttavan lääkeaineen pitoisuus lääkevalmisteista määritetään usein korkean erotuskyvyn nestekromatografialla. HPLC-laitteet ja kolonnit kehittyvät koko ajan, minkä vuoksi myös analyysimenetelmiä kehitetään, jotta ne olisivat mahdollisimman nopeita ja tulokset luotettavia.

Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää lääkevalmisteen vaikuttavan lääkeaineen pitoisuuden analysointimenetelmää luotettavammaksi ja nopeammaksi sekä validoida se. Vanhassa menetelmässä vaikuttavan lääkeaineen pitoisuuden analysointi perustui piikin korkeuteen, ja nyt tarkoituksena oli muuttaa kvantitointi perustumaan piikin pinta-alaan. Tarkoituksena oli myös muuttaa ajoliuosta, jotta sen valmistaminen olisi mahdollisimman nopeaa ja ympäristön kuormitus mahdollisimman vähäistä. Ajoliuoksesta oli tarkoitus myös poistaa ioniparireagenssin käyttö. Tarkoituksena oli validoida uusi kehitetty menetelmä hyödyntäen ICH:n Validation of Analytical Procedures Q2(R2) -ohjetta. Validoinnissa määritettiin ohjeen mukaan häiriöalttius, lineaarisuus, oikeellisuus, spesifisyys, toistettavuus ja uusittavuus.

Opinnäytetyössä onnistuttiin kehittämään menetelmä vaikuttavan lääkeaineen pitoisuuden määrittämiseen, missä kvantitointi vaihdettiin perustumaan piikin pinta-alaan. Ajoliuokseksi löydettiin kaliumdivetyfosfaatista valmistettu puskuri, joka on taloudellinen, ympäristöä vähemmän kuormittava sekä nopea valmistaa. Kaikki validoitavat parametrit täyttivät hyväksymiskriteerit. Opinnäytetyö sisältää salassa pidettävää tietoa, jota ei ole sisällytetty julkiseen versioon. Opinnäytetyön julkisessa versiossa ei kerrota lääkevalmisteen vaikuttavaa lääkeainetta eikä kehitetyn menetelmän ajoliuoksen tarkkaa koostumusta tai menetelmän parametrejä.

High performance liquid chromatography is a commonly used method in pharmaceutical industry. It can be used to determine the concentration or the degradation products of the active medicinal substance.

The purpose of this thesis was to develop a HPLC analysis method for determining concentration of the active substance of medicinal product and validating the new developed method. The aim was to change the quantification of the concentration to be based on the area of the peaks instead of the height and find the simplest possible solutions for the analysis. Finding new mobile phase that does not contain an ion pair reagent was one of the main purposes. The aim was also to validate the new developed method using the ICH’s guide Validation of Analytical Procedures Q2(R2). The parameters to be validated were robustness, linearity, accuracy, specificity, repeatability, and intermediate precision.

The method for determining the concentration of the active substance was successfully developed. The quantification was changed to be based on the peak area instead of the height. A buffer made of potassium dihydrogen phosphate was found to be a good mobile phase, which is economical, less burdensome on the environment and quick to make. All the validated parameters met the acceptance criteria.

The thesis contains confidential matters. The investigated medicinal product, the active substance, the exact composition of the mobile phase and the parameters of the developed method are not discussed in the public version.