ABO-veriryhmän alatyyppien genotyypitysmenetelmän koestus

Abstract

ABO-veriryhmäjärjestelmä perustuu punasolun pinnalla oleviin antigeeneihin A ja B, niiden muodostamiin veriryhmiin A, B, AB ja O sekä plasmassa oleviin vasta-aineisiin anti-A ja anti-B. ABO-veriryhmistä tunnetaan myös alatyyppejä, jotka ovat muodostuneet, kun jokin antigeeni muuttuu geneettisesti. Alatyypit ovat populaatiosta riippuvaisia ja hankaloittavat veriryhmien serologista tunnistamista. Kun veriryhmä on epäselvä, normaalit verensiirtosäännöt eivät enää päde. Tällöin veriryhmä täytyy määrittää geenitasolla, jotta tiedetään täsmällisesti, mikä veriryhmä potilaalla on.

Opinnäytetyön tarkoituksena oli testata, soveltuuko RBC-Ready Gene ABO Subtype -reagenssipakkaus Suomen Punaisen Ristin (SPR) Veripalveluun ABO-veriryhmäjärjestelmän alatyyppien genotyypitysmenetelmäksi. Tavoitteena oli selvittää, onko menetelmä toistettava ja luotettava.

Käytännön toteutus suoritettiin SPR Veripalvelussa. EDTA-verestä eristetystä DNA:sta määritettiin tarkempi veriryhmä käyttäen Inno-Trainin RBC-Ready Gene ABO Subtype -reagenssipakkausta. Näytteitä oli kaiken kaikkiaan 26. Reagenssipakkauksen 8 näytepaikassa on jokaisessa sekvenssispesifiset alukkeet (SSP= sequence spesific primers), jotka tarttuvat tiettyihin mutaatiokohtiin DNA:ssa. DNA monistettiin polymeraasiketjureaktiolla (PCR), minkä jälkeen monistustuotteet eroteltiin geelielektroforeesilla ja värjättiin ethidiumbromidilla. Erottelun jälkeen geelit kuvattiin ultraviolettivalossa ja kuvat analysoitiin tulkintakaavion avulla.

RBC-Ready Gene ABO Subtype -menetelmä ei tunnistanut suomalaisessa väestössä yleisimmin esiintyviä ABO-veriryhmän alatyyppien mutaatioita. Reagenssipakkausta ei oteta käyttöön SPR Veripalvelussa. Epäselvien veriryhmien tutkiminen jatkuu serologisesti entiseen tapaan ainakin toistaiseksi.

ABO blood group system is based on antigens A and B on red blood cells and antibodies anti-A and anti-B in serum. The red blood cells of blood type A has antigen A and the serum contains anti-B antibody. Blood type B has antigen B and anti-A antibody. Blood type AB has both A and B antigens but no antibodies. Blood type O has no antigens but contains both anti-A and anti-B antibodies. When antigen transforms genetically, ABO subtypes are formed. Genetically, populations have their own subtypes. Serological methods are insufficient in recognizing various ABO subtypes. ABO subtypes may cause clinical situations where normal blood transfusion procedures cannot be applied.

The purpose of our study was to find out if the most common mutations among the Finnish population can be recognized by an ABO blood group genotyping method. In our study, we focused on using the RBC-Ready Gene ABO Subtype kit. The target of our study was to study if the method was reliable and repeatable.

Our study was executed at Finnish Red Cross Blood Service where 26 samples were analyzed by using PCR-SSP method and Inno-Train RBC-Ready Gene ABO-Subtype kit. The samples that we used were DNA isolated from EDTA-blood. The kit contains sequence specific primers (SSP) that anneals to DNA sequence, where the mutation is located. DNA was amplified by polymerase chain reaction (PCR) method. PCR products were separated by electrophoresis and shooted in UV-camera.

Based on our study, RBC-Ready Gene ABO-Subtype test does not recognize the most common mutations among the Finnish population. Finnish Red Cross Blood Service will not use this method for ABO subtype genotyping. ABO subtyping by serological method will continue for the time being.