Kapillaariseen isoelektriseen fokusointiin perustuvan analyysimenetelmän kehittäminen ja validointi
Tamminen, Tuulia (2016)
Tamminen, Tuulia
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201601291742
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201601291742
Tiivistelmä
Monoklonaaliset vasta-aineet ovat nousseet viime vuosina merkittäviksi terapeuttisina proteiineina sekä diagnostiikassa. Monoklonaalisia vasta-aineita käytetään erityisesti syöpien ja autoimmuunitautien hoidossa. Kasvamassa oleva terapeuttisten vasta-aineiden määrä lisää tarvetta myös tehokkaille analyysimenetelmille vasta-aineiden karakterisoimiseksi. Pienetkin muutokset vasta-aineen monimutkaisessa rakenteessa voivat vaikuttaa olennaisesti valmisteen tehoon ja turvallisuuteen.
Opinnäytetyö tehtiin Yliopiston Apteekin analyyttisessa laboratoriossa. Työn tarkoituksena oli kehittää kapillaariseen isoelektriseen fokusointiin (cIEF) perustuva analyysimenetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden varausten heterogeenisyyden tutkimiseen. Menetelmällä oli tarkoitus korvata perinteinen geelillä ajettava isoelektrinen fokusointi (IEF) monoklonaalisten vasta-aineiden rutiinianalytiikassa. Lisäksi tässä opinnäytetyössä haluttiin vertailla cIEF:n ja kapillaarivyöhyke-elektroforeesin (CZE) soveltuvuutta monoklonaalisten vasta-aineiden varausprofiilien tutkimiseen. Menetelmien pystyttämisen jälkeen validoitiin molemmat menetelmät ja tulosten perusteella arvioitiin menetelmien vahvuuksia ja heikkouksia.
CZE:n etuna oli yksinkertaisempi näytteenkäsittely ja pienemmät analyysikustannukset kuin cIEF:ssä. cIEF:llä saadaan kuitenkin vasta-aineen varausprofiilin lisäksi selville myös isoformien pI-arvot, mikä ei ole mahdollista CZE:llä. Migraatioaikojen toistettavuudessa oli ongelmia molemmilla menetelmillä, mutta CZE:llä migraatioaikojen toistettavuus oli hieman parempi. cIEF-menetelmällä saatiin kuitenkin toistettavia pI-arvoja, kun käytettiin sisäisenä standardina pI-markkereita.
Validoinnin tulosten perusteella molemmat menetelmät soveltuvat aiottuun käyttötarkoitukseen. cIEF:llä ja CZE:llä saatuja tuloksia ei voi verrata suoraan toisiinsa, koska menetelmät antavat erilaista tietoa vasta-aineen ominaisuuksista. Yhdessä muiden analyysimenetelmien kanssa cIEF ja CZE ovat tehokkaita työkaluja monoklonaalisten vasta-aineiden karakterisointiin.
Opinnäytetyö tehtiin Yliopiston Apteekin analyyttisessa laboratoriossa. Työn tarkoituksena oli kehittää kapillaariseen isoelektriseen fokusointiin (cIEF) perustuva analyysimenetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden varausten heterogeenisyyden tutkimiseen. Menetelmällä oli tarkoitus korvata perinteinen geelillä ajettava isoelektrinen fokusointi (IEF) monoklonaalisten vasta-aineiden rutiinianalytiikassa. Lisäksi tässä opinnäytetyössä haluttiin vertailla cIEF:n ja kapillaarivyöhyke-elektroforeesin (CZE) soveltuvuutta monoklonaalisten vasta-aineiden varausprofiilien tutkimiseen. Menetelmien pystyttämisen jälkeen validoitiin molemmat menetelmät ja tulosten perusteella arvioitiin menetelmien vahvuuksia ja heikkouksia.
CZE:n etuna oli yksinkertaisempi näytteenkäsittely ja pienemmät analyysikustannukset kuin cIEF:ssä. cIEF:llä saadaan kuitenkin vasta-aineen varausprofiilin lisäksi selville myös isoformien pI-arvot, mikä ei ole mahdollista CZE:llä. Migraatioaikojen toistettavuudessa oli ongelmia molemmilla menetelmillä, mutta CZE:llä migraatioaikojen toistettavuus oli hieman parempi. cIEF-menetelmällä saatiin kuitenkin toistettavia pI-arvoja, kun käytettiin sisäisenä standardina pI-markkereita.
Validoinnin tulosten perusteella molemmat menetelmät soveltuvat aiottuun käyttötarkoitukseen. cIEF:llä ja CZE:llä saatuja tuloksia ei voi verrata suoraan toisiinsa, koska menetelmät antavat erilaista tietoa vasta-aineen ominaisuuksista. Yhdessä muiden analyysimenetelmien kanssa cIEF ja CZE ovat tehokkaita työkaluja monoklonaalisten vasta-aineiden karakterisointiin.