Escherichia coli -bakteerin määritysmenetelmän verifiointi
Kekola, Heidi (2020)
Kekola, Heidi
2020
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2020102421601
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2020102421601
Tiivistelmä
Seinäjoen Valion aluelaboratoriossa Escherichia coli -bakteerin määritysmenetelmä vaihdetaan ISO 16649-2:2001-standardin mukaiseksi ja opinnäytetyönä käyttöönotettavalle menetelmälle tehtiin verifiointi. Menetelmä on validoitu Valion Pitäjänmäen laboratoriossa.
Verifioinnissa suoritettiin koetestauksia menetelmään kuuluvalla selektiivisellä tryptoni-sappi-x-glukuronidi-agarilla, joka perustuu β-glukronidaasin havaitsemiseen kromoforin avulla. Inkubointi tapahtui 44 °C:ssa ja E. coli -pesäkkeet kasvoivat tyypillisinä sinisinä pesäkkeinä. E. coli -bakteerista käytettiin ISO 11133:2014 kasvualustojen testaus -standardissa listattuja kantakokoelmakantoja. Verifioinnilla osoitettiin kasvualustan toimivuus kyseisessä laboratoriossa ja laboratorion taito käyttää kyseistä menetelmää ja tunnistaa bakteeri uudelta alustalta. Näytteinä käytettiin valikoiden Valion omia tuotevalikoimatuotteita. Testejä tehtiin kontaminoimattomilla ja kontaminoiduilla näytteillä sekä interkalibrointinäytteillä. Lisäksi testattiin kasvualustan tuottavuus, selektiivisyys ja spesifisyys. Tuottavuustesti tehtiin kahdella E. coli -kannalla ja verrattiin tuloksia yleisalustan antamiin tuloksiin. Standardin mukaan selektiivisyys testattiin Enterococcus faecalis -bakteerilla ja spesifisyys Citrobacter freundii -bakteerilla. Testauksessa käytettiin sekä kvantitatiivisia että kvalitatiivisia menetelmiä. Verifioitavan menetelmän rinnalla vertailumenetelmänä käytössä olevaa NMKL 125, 4th. 2005-menetelmää, jossa vertailuagarina oli selektiivinen kristallivioletti-sappi-agar. Lisäksi varmistustestinä on käytetty β-glukuronidaasin tuotto testiä. Tuottavuustestauksessa vertailuagarina oli yleisalusta tryptoni-soija-agar. Kummallakaan menetelmällä ei pystytä havaitsemaan enterohemorragista E. coli -bakteeria (EHEC:iä) sen E. coli -bakteereille tyypillisen käyttäytymisen puutteen vuoksi.
E. coli havaittiin hyvin uudelta kasvualustalta ja kasvualusta toimi odotetusti. Menetelmä on nopea, selkeä eikä varmistustestejä tarvita. Bakteeripesäkkeet oli helppo tunnistaa sinisen värinsä ansiosta, vaikka näytteen joukossa olisi ollut häiritseviä elementtejä tuotteesta. Pesäkemäärissä suuria eroja ei uuden ja vanhan menetelmän välillä ollut. Tuottavuustestauksessa pakasteampulli toimi huonosti ja sen toimivuuteen tulisi jatkossa kiinnittää huomiota.
Verifioinnissa suoritettiin koetestauksia menetelmään kuuluvalla selektiivisellä tryptoni-sappi-x-glukuronidi-agarilla, joka perustuu β-glukronidaasin havaitsemiseen kromoforin avulla. Inkubointi tapahtui 44 °C:ssa ja E. coli -pesäkkeet kasvoivat tyypillisinä sinisinä pesäkkeinä. E. coli -bakteerista käytettiin ISO 11133:2014 kasvualustojen testaus -standardissa listattuja kantakokoelmakantoja. Verifioinnilla osoitettiin kasvualustan toimivuus kyseisessä laboratoriossa ja laboratorion taito käyttää kyseistä menetelmää ja tunnistaa bakteeri uudelta alustalta. Näytteinä käytettiin valikoiden Valion omia tuotevalikoimatuotteita. Testejä tehtiin kontaminoimattomilla ja kontaminoiduilla näytteillä sekä interkalibrointinäytteillä. Lisäksi testattiin kasvualustan tuottavuus, selektiivisyys ja spesifisyys. Tuottavuustesti tehtiin kahdella E. coli -kannalla ja verrattiin tuloksia yleisalustan antamiin tuloksiin. Standardin mukaan selektiivisyys testattiin Enterococcus faecalis -bakteerilla ja spesifisyys Citrobacter freundii -bakteerilla. Testauksessa käytettiin sekä kvantitatiivisia että kvalitatiivisia menetelmiä. Verifioitavan menetelmän rinnalla vertailumenetelmänä käytössä olevaa NMKL 125, 4th. 2005-menetelmää, jossa vertailuagarina oli selektiivinen kristallivioletti-sappi-agar. Lisäksi varmistustestinä on käytetty β-glukuronidaasin tuotto testiä. Tuottavuustestauksessa vertailuagarina oli yleisalusta tryptoni-soija-agar. Kummallakaan menetelmällä ei pystytä havaitsemaan enterohemorragista E. coli -bakteeria (EHEC:iä) sen E. coli -bakteereille tyypillisen käyttäytymisen puutteen vuoksi.
E. coli havaittiin hyvin uudelta kasvualustalta ja kasvualusta toimi odotetusti. Menetelmä on nopea, selkeä eikä varmistustestejä tarvita. Bakteeripesäkkeet oli helppo tunnistaa sinisen värinsä ansiosta, vaikka näytteen joukossa olisi ollut häiritseviä elementtejä tuotteesta. Pesäkemäärissä suuria eroja ei uuden ja vanhan menetelmän välillä ollut. Tuottavuustestauksessa pakasteampulli toimi huonosti ja sen toimivuuteen tulisi jatkossa kiinnittää huomiota.