RCOR2-vasta-aineiden testaus

Abstract

RCOR2 on suhteellisen hiljattain havaittu proteiini, jonka kaikkia toimintatapoja ei vielä tiedetä. Samaan perheeseen kuuluvat myös RCOR1 ja -3. Toiselta nimeltään ne ovat CoREST-proteiineja. RCOR1 on näistä eniten tutkittu. Tämän työn tarkoituksena oli selvittää kaupallisten RCOR2:lle tehtyjen vasta-aineiden toimivuutta. Työ suoritettiin yhteistyössä Riku Kivirannan tutkimusryhmän kanssa, joka toimii Turun yliopistossa. Työssä kasvatettiin muutamia solulinjoja, tärkeimpänä HEK293T-solut, joista kerättiin näytteet. Niiden analysointiin käytettiin menetelmiä kuten SDS-PAGE, Western blot, immunopresipitaatio ja tulokset kehitettiin röntgenfilmille. RCOR2-vasta-aineista yksi saatiin toimimaan Western-menetelmässä RCOR2:ta ylituottavissa soluissa, mutta luonnollisesti eli endogeenisesti E1-soluissa esiintyvää RCOR2-proteiinia sillä ei onnistuttu havaitsemaan. Yksikään ei sopinut käytettäväksi immunopresipitaatiossa.

RCOR2 is a fairly recently discovered protein whose working mechanisms are not fully understood yet. It is part of a protein family which is also called CoREST and comprises RCOR1, -2, and -3. CoREST1 is the most studied of the three and its mechanisms are best known. The main focus of this study was to test three commercially available antibodies for the RCOR2 protein. The work was performed in co-operation with Riku Kiviranta’s research group in Turku University. The samples were gathered by cell culturing a few different cell lines, mainly HEK293T cells. The techniques used in analyzing included SDS-PAGE, Western blot, and immunoprecipitation. The end results were developed on x-ray film with enhanced chemiluminescence. Of the three antibodies one was proven successful in identifying RCOR2 in the Western blot of the total cell lysates. However none could identify the RCOR2 protein formed endogenously in MC3T3-E1 cells. None of the antibodies tested worked correctly with the immunoprecipitation protocol.