Pikornavirusvasta-aineiden testaaminen immunofluoresenssimikroskopiaa käyttäen
Aalto, Niina (2016)
Aalto, Niina
Turun ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605259786
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605259786
Tiivistelmä
Opinnäytetyön aiheena oli testata erilaisten vasta-aineiden kykyä tunnistaa pikornaviruksia käyttäen immunofluoresenssimenetelmää (IFA). Työ tehtiin Turun yliopistossa, Virusopilla AIROPico-projektissa. Pikornavirukset ovat pieniä, vaipattomia RNA-viruksia, jotka aiheuttavat ihmiselle monia erilaisia tauteja, kuten flunssaa ja aseptista aivokalvontulehdusta. Työssä käytettiin pääasiassa pikornavirus-perheeseen kuuluvia rinoviruksia.
Työ sisälsi soluviljelyä, virus-RNA:n puhdistusta, RT-qPCR-tekniikan käyttöä, virusinfektiota, solujen fiksausta, vasta-ainevärjäystä sekä mikroskopointia. RT-qPCR-menetelmää käytettiin varmentamaan viruksien lisääntymiskyky. Vasta-aineiden testaus suoritettiin infektoimalla ja fiksaamalla HeLa-E8-soluja 96-kuoppalevyllä, värjäämällä ne vasta-aineilla ja tarkastelemalla tuloksia fluoresenssimikroskoopilla. Värjätyt solut kuvannettiin. RT-qPCR:n ja IFA:n tuloksia verrattiin toisiinsa.
Kahdeksan vasta-ainetta testattiin 20 pikornavirustyyppiä vastaan. Eniten viruksia tunnistivat monoklonaaliset vasta-aineet MAb C01698M (7 kpl) ja C01696M (6 kpl). MAb C01698M tunnisti rinovirustyypit A2, A10, A39, A49, A80, B91 ja kliinisen näytteen #592. MAb C01696M tunnisti rinovirustyypit A2, A10, B14, A39, A49 ja A80. MAb HRV-16-7 ei tunnistanut yhtään virusta. Loput käytetyistä vasta-aineista tunnistivat 1-4 virusta. Epävarmoja tuloksia oli paljon suuren taustan vuoksi.
Työ sisälsi soluviljelyä, virus-RNA:n puhdistusta, RT-qPCR-tekniikan käyttöä, virusinfektiota, solujen fiksausta, vasta-ainevärjäystä sekä mikroskopointia. RT-qPCR-menetelmää käytettiin varmentamaan viruksien lisääntymiskyky. Vasta-aineiden testaus suoritettiin infektoimalla ja fiksaamalla HeLa-E8-soluja 96-kuoppalevyllä, värjäämällä ne vasta-aineilla ja tarkastelemalla tuloksia fluoresenssimikroskoopilla. Värjätyt solut kuvannettiin. RT-qPCR:n ja IFA:n tuloksia verrattiin toisiinsa.
Kahdeksan vasta-ainetta testattiin 20 pikornavirustyyppiä vastaan. Eniten viruksia tunnistivat monoklonaaliset vasta-aineet MAb C01698M (7 kpl) ja C01696M (6 kpl). MAb C01698M tunnisti rinovirustyypit A2, A10, A39, A49, A80, B91 ja kliinisen näytteen #592. MAb C01696M tunnisti rinovirustyypit A2, A10, B14, A39, A49 ja A80. MAb HRV-16-7 ei tunnistanut yhtään virusta. Loput käytetyistä vasta-aineista tunnistivat 1-4 virusta. Epävarmoja tuloksia oli paljon suuren taustan vuoksi.