Antibioottiseulontatestin kehittäminen
Helminen, Hanna (2016)
Helminen, Hanna
Turun ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201701111283
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201701111283
Tiivistelmä
Antibioottiresistenssi on maailmanlaajuinen ja kasvava ongelma, johon tarvitaan ratkaisuja. Tutkimuksen ja kehityksen merkitys on suuri, sillä tarvitaan diagnostisia menetelmiä, joiden avulla voidaan vähentää turhaa antibioottien käyttöä.
Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää antibioottiseulontatesti, joka olisi nopea, helppokäyttöinen ja siihen tarvittava laitteisto löytyisi lähes jokaisesta laboratoriosta. Menetelmä perustuu epästabiileihin lantanidikelaatteihin ja aikaerotteisen fluoresenssin mittaamiseen. Seulontatesti suoritetaan suodatinkuoppalevyllä, jossa mediumissa olevat bakteerit suodatetaan ja pestään pesuliuoksella. Menetelmän kehitykseen kuului olosuhteiden optimointi. Menetelmässä käytetty suodatin- ja siirtokuoppalevy, näytetilavuus, pesuliuokset ja kelaattiliuoksen koostumus optimoitiin.
Verrattaessa kehitettyä menetelmää tunnettuun absorbanssin mittaamiseen, huomattiin menetelmän havaitsevan antibiootin vaikutus bakteerien kasvuun noin kaksi tuntia nopeammin. Kehitetty menetelmä on myös absorbanssimenetelmää herkempi. Antibioottiseulontatesti havaitsee 30 000 E. coli solua/ml ja siksi sillä voidaan seuloa potilasnäytteisiin tehoavia antibiootteja riippuen näytteessä olevasta bakteerimäärästä
Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää antibioottiseulontatesti, joka olisi nopea, helppokäyttöinen ja siihen tarvittava laitteisto löytyisi lähes jokaisesta laboratoriosta. Menetelmä perustuu epästabiileihin lantanidikelaatteihin ja aikaerotteisen fluoresenssin mittaamiseen. Seulontatesti suoritetaan suodatinkuoppalevyllä, jossa mediumissa olevat bakteerit suodatetaan ja pestään pesuliuoksella. Menetelmän kehitykseen kuului olosuhteiden optimointi. Menetelmässä käytetty suodatin- ja siirtokuoppalevy, näytetilavuus, pesuliuokset ja kelaattiliuoksen koostumus optimoitiin.
Verrattaessa kehitettyä menetelmää tunnettuun absorbanssin mittaamiseen, huomattiin menetelmän havaitsevan antibiootin vaikutus bakteerien kasvuun noin kaksi tuntia nopeammin. Kehitetty menetelmä on myös absorbanssimenetelmää herkempi. Antibioottiseulontatesti havaitsee 30 000 E. coli solua/ml ja siksi sillä voidaan seuloa potilasnäytteisiin tehoavia antibiootteja riippuen näytteessä olevasta bakteerimäärästä