RNA:n, DNA:n ja proteiinien koon, pitoisuuden ja laadun määrityksen validointi Bioanalyzer 2100 -laitteelle
Partanen, Maria (2017)
Partanen, Maria
Tampereen ammattikorkeakoulu
2017
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2017112818631
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2017112818631
Tiivistelmä
Opinnäytetyö tehtiin FICAM:lle, joka on Tampereen yliopiston lääketieteen ja biotieteiden tiedekuntaan kuuluva tutkimuskeskus. FICAM on eläinkokeille vaihtoehtoisten menetelmien asiantuntijakeskus, joka kehittää ja validoi in vitro kudos- ja elinmalleja. Kudos- ja elinmallit perustuvat erilaistettuihin kantasoluihin, joista rakennetaan useiden solutyyppien yhdistelmä soluviljelyssä. Malleista voidaan eristää mm. RNA:ta, josta tutkitaan esimerkiksi geeniekspressiota ja arvioidaan sytotoksisuutta. FICAM:iin oli hankittu bioanalysaattori RNA:n, DNA:n ja proteiinien koon ja määrän analysointiin, mutta laite ei ollut vielä GLP-käytössä.
Opinnäytetyön tavoitteena oli todistaa bioanalysaattori hyväksyttäväksi GLP-käyttöön. Tarkoituksena oli validoida laite ja menetelmät RNA:n, DNA:n ja proteiinien pitoisuuden, koon ja laadun määritykseen. Menetelmiin valittiin sopivat kitit ja referenssiaineet laitteen käyttötarkoituksen perusteella. Tulosten perusteella arvioitiin järjestelmän toiminnan ja kittien toistettavuutta ja tarkkuutta. FICAM:in vaatimusten sekä Bioanalyzer 2100 -laitteen valmistajan, Agilent Technologies:in ilmoittamien arvojen perusteella validoinnille asetettiin hyväksymiskriteerit.
Bioanalyzer 2100 läpäisi validoinnin hyväksymiskriteerit RNA:n DNA:n ja proteiinien koon, pitoisuuden ja eheyden määrityksessä. Laite sopii rutiinimenetelmiin sekä laadunvarmistukseen. Analyyseihin tarvitaan hyvin vähän reagensseja, mikä on kustannustehokasta sekä vaarallisen jätteen määrä vähenee. Jatkotoimenpiteenä laitteelle voidaan tarvittaessa validoida useampi kitti sen mukaan, millaisia näytteitä halutaan analysoida.
Opinnäytetyön tavoitteena oli todistaa bioanalysaattori hyväksyttäväksi GLP-käyttöön. Tarkoituksena oli validoida laite ja menetelmät RNA:n, DNA:n ja proteiinien pitoisuuden, koon ja laadun määritykseen. Menetelmiin valittiin sopivat kitit ja referenssiaineet laitteen käyttötarkoituksen perusteella. Tulosten perusteella arvioitiin järjestelmän toiminnan ja kittien toistettavuutta ja tarkkuutta. FICAM:in vaatimusten sekä Bioanalyzer 2100 -laitteen valmistajan, Agilent Technologies:in ilmoittamien arvojen perusteella validoinnille asetettiin hyväksymiskriteerit.
Bioanalyzer 2100 läpäisi validoinnin hyväksymiskriteerit RNA:n DNA:n ja proteiinien koon, pitoisuuden ja eheyden määrityksessä. Laite sopii rutiinimenetelmiin sekä laadunvarmistukseen. Analyyseihin tarvitaan hyvin vähän reagensseja, mikä on kustannustehokasta sekä vaarallisen jätteen määrä vähenee. Jatkotoimenpiteenä laitteelle voidaan tarvittaessa validoida useampi kitti sen mukaan, millaisia näytteitä halutaan analysoida.