Validering och implementering av EliA Calprotectin 2 för mätning av fekalt kalprotektin med immunanalysatorn Phadia 250

Abstract

Abstrakt

Kalprotektin är ett protein som förekommer rikligt i neutrofila granulocyter, som utsöndrar kalprotektin i tarmlumen vid inflammatoriska tarmsjukdomar (IBD, inflammatory bowel disease). Den ökade kalprotektinutsöndringen innebär högre kalprotektinhalt i avföringen och tyder på tarminflammation. Fekal kalprotektinundersökning (F-Calpro) kan användas för särskiljning mellan IBD och funktionell tarmsjukdom (IBS, irritable bowel syndrome), vid uppföljningen och behandlingen av IBD samt att förutspå aktivare sjukdomsperioder hos IBD-patienter.

Examensarbetets syfte var att validera och implementera kalprotektinanalysmetoden EliA Calprotectin 2 med immunanalysatorn Phadia 250. Metoden som användes med Phadia 250 för att mäta kalprotektinhalten benämns EliA och är en fluorescens-enzymimmunometod (FEIA). De uppmätta kalprotektinhalterna som erhölls med EliA Calprotectin och EliA Calprotectin 2 jämfördes. EliA Calprotectin 2 hade uppdaterade reagens jämfört med EliA Calprotectin, men båda analyserna utfördes med samma EliA-metod.

För examensarbetet samlades 67 avföringsprover. Avföringsproverna späddes med reagens från EliA Calprotectin och EliA Calprotectin 2, varefter kalprotektinhalten i de två olika spädningarna analyserades med Phadia 250.

EliA Calprotectin 2 har enligt tillverkaren en bättre känslighet än EliA Calprotectin, vilket kan antydas från detta examensarbete. EliA Calprotectin och EliA Calprotectin 2 jämfördes och en högre kalprotektinhalt uppmättes oftare med EliA Calprotectin 2. EliA Calprotectin 2 bedömdes pålitlig att ersätta EliA Calprotectin. En skillnad fanns i de uppmätta kalprotektinhalterna, som troligen berodde på den bättre känsligheten hos EliA Calprotectin 2. Implementeringen av EliA Calprotectin 2 för Phadia 250 genomfördes efter valideringen.

Tiivistelmä

Neutrofiilisissä granulosyyteissä on runsaasti proteiinia, varsinkin kalprotektiinia. Neutrofiilit vapauttavat kalprotektiinia suoliston luumeniin tulehduksellisissa suolistosairauksissa (IBD, inflammatory bowel disease). Lisääntynyt kalprotektiinieritys tarkoittaa korkeampaa kalprotektiinipitoisuutta ulosteessa ja viittaa mahdolliseen suolistotulehdukseen. Ulosteen kalprotektiinitutkimusta (F-Calpro) voidaan käyttää IBD:n ja ärtyvän suoliston oireyhtymän (IBS, irritable bowel syndrome) erotusdiagnostiikassa, IBD-potilaiden seurannassa ja hoidossa, sekä IBD-potilaiden aktiivisen sairausvaiheen ennustamisessa.

Opinnäytetyön tarkoitus oli validoida ja ottaa käyttöön kalprotektiinianalyysimenetelmä, EliA Calprotectin 2, Phadia 250 -immunoanalysaattorilla. Kalprotektiinipitoisuuden määritykseen Phadia 250 -immunoanalysaattorilla käytettyä fluoroentsyymi-immunomenetelmää (FEIA) kutsutaan EliA-mentelmäksi. EliA Calprotectin 2 -analyysipaketin reagenssit on uudistettu. Opinnäytetyössä verrattiin EliA-menetelmällä mitattuja kalprotektiinipitoisuuksia alkuperäisillä (EliA Calprotectin) ja uudistetuilla (EliA Calprotectin 2) reagensseilla.

Opinnäytetyössä kerättiin 67 ulostenäytettä. Ulostenäytteet laimennettiin alkuperäisillä (EliA Calprotectin) ja uudistetuilla (EliA Calprotectin 2) reagensseilla, minkä jälkeen kalprotektiinipitoisuus analysoitiin molemmista laimennuksista Phadia 250 -immunoanalysaattorilla.

EliA Calprotectin 2 -analyysilla on valmistajan mukaan aiempaa parempi herkkyys, mikä myös ilmenee tässä opinnäytetyössä. Vertailussa EliA Calprotectin 2 antoi useammin korkeampia kalprotektiinipitoisuuksia kuin EliA Calprotectin. EliA Calprotectin 2 hyväksyttiin luotettavana EliA Calprotectin -analyysin korvaajana. Mitatuissa kalprotektiinipitoisuuksissa oli ero, joka luultavasti riippui EliA Calprotectin 2 -analyysin paremmasta herkkyydestä. EliA Calprotectin 2 -analyysin käyttöönotto Phadia 250 -immunoanalysaattorilla toteutettiin validoinnin jälkeen.

Abstract

Calprotectin is an abundant protein in neutrophilic granulocytes and is released from neutrophilic granulocytes into the intestinal lumen during inflammatory bowel disease (IBD). The increased release of calprotectin causes a higher calprotectin level in faeces and is an indication of intestinal inflammation. Faecal calprotectin analysis (F-Calpro) can be used to differentiate between IBD and irritable bowel syndrome (IBS), to monitor and treat IBD patients and to predict a more active disease period in IBD patients.

The aim of this thesis was to validate and implement the EliA Calprotectin 2 assay for measurement of calprotectin levels with the Phadia 250 immunoanalyser. The method used with Phadia 250 to measure the calprotectin level is called EliA and is a fluorescence enzyme immunoassay (FEIA). The measured calprotectin levels with EliA Calprotectin and EliA Calprotectin 2 were compared. EliA Calprotectin 2 had updated reagents compared to EliA Calprotectin, however, both assays used the same EliA method.

For the thesis 67 faecal samples were collected. The faecal samples were diluted with reagents from EliA Calprotectin and EliA Calprotectin 2, and the calprotectin level was analysed from the two different dilutions with the Phadia 250 immunoanalyser.

EliA Calprotectin 2 has a higher sensitivity than EliA Calprotectin according to the manufacturer, which can be indicated from this thesis. EliA Calprotectin and EliA Calprotectin 2 were compared, and a higher calprotectin level was more often measured with EliA Calprotectin 2. EliA Calprotectin 2 was approved as reliable to replace EliA Calprotectin. There was a difference between the measured calprotectin levels, which probably was due to the higher sensitivity of EliA Calprotectin 2. The implementation of EliA Calprotectin 2 for Phadia 250 was done after the validation.