Tsoledronaatin in vivo -vaikutukset rintasyövän lähetti-RNA:n ilmentymiseen

Abstract

Rintasyöpä on yleisin naisilla esiintyvä syöpä Suomessa. Tällä hetkellä muualle elimistöön etäpesäkkeitä lähettänyttä rintasyöpää ei pystytä parantamaan, vaan hoidossa keskitytään potilaan elinajan pidentämiseen ja oireiden hoitamiseen. Tsoledronaattia käytetään osteoporoosin ja luumetastaaseista johtuvien oireiden etenemisen hidastamiseen tai estämiseen, sillä on aiemmin havaittu olevan mahdollisesti myös joitakin suoraan syövän vastaisia vaikutuksia.

Tämän opinnäytetyön tavoitteena oli osana muuta tutkimusta selvittää, onko tsoledronaatin antamisesta apua rintasyöpäpotilaalle jo varhaisessa taudin toteamisen vaiheessa. Työssä mitattiin Balb/c nude -hiirten ihonalaiskudokseen istutetun kolmoisnegatiivisen rintasyöpäkasvaimen mRNA:n ilmentymistä tsoledronaattia saaneissa ja kontrolliryhmissä.

Kasvainnäytteistä eristettiin RNA, josta käänteistranskription avulla valmistettiin mRNA:lle komplementaarinen cDNA. cDNA:sta tutkittiin kiinnostuksen kohteiksi valittujen Rock1- ja E2F3 -geenien mRNA-aktiivisuutta reaaliaikaisen polymeraasiketjureaktion avulla. Valitut geenit liittyvät solun migraatioon ja solusyklin säätelyyn.

Tsoledronaatilla ei näyttäisi olevan merkittävää vaikutusta Rock1:n ilmentymiseen. E2F3:n ekspressio oli merkittävästi suurempi TLR9-knockout -kontrolliryhmässä kuin normaalissa kontrolliryhmässä, mikä viittaisi siihen, että TLR9:ää ekspressoimattomat kasvainsolut jakautuisivat voimakkaammin. E2F3:n ekspressio aleni tsoledronaattia saaneessa TLR9-knockout -ryhmässä, mikä viittaisi siihen, että tsoledronaatti vähentäisi kasvainsolujen jakautumista TLR9:ää ekspressoimattomassa kasvaimessa.

Breast cancer is the most common cancer appearing in women in Finland. A metastatic breast cancer is considered incurable for now, so the treatment is focused on relieving the symptoms and lengthening the lifespan of the patient. Zoledronate has been noted to possibly have some direct anticancer effects.

The aim of this thesis was as a part of other study to see if patients with an early state breast cancer profit of zoledronate treatment. The mRNA expression of a triple negative breast cancer xenografted in balb/c nude mice subcutaneous tissue was studied in this experiment. There were control groups and zoledronate treated groups.

RNA was extracted from the tumor samples and then a complementary cDNA was made from the mRNA using reverse transcription. The mRNA activity of Rock1 and E2F3 was measured using Real Time polymerase transcription. The genes of interest are associated with cell migration and regulation of cell cycle.

Zoledronate doesn’t seem to have a statistically significant effect on Rock1 expression. E2F3 expression was significantly higher in no treatment TLR9 knockout-group compared to the normal control group, which suggests that the cell division is less frequent in a tumor that expresses TLR9. E2F3 expression decreased in zoledronate treated TLR9 knockout groups. This suggests that zoledronate decreases cell division in a tumor that doesn’t express TLR9.