MDR-protokollan optimointi : sukusolujen eristys ja keräys hiiren kiveksistä

Abstract

Miesten hedelmättömyys on länsimaissa kasvava ongelma. Uusimpien tutkimusten mukaan sperman laatu on ollut pitkään laskusuunnassa ja edelleen huonontunut. Spermatogeneesin ja sen geeninsäätelyn parempi ymmärtäminen auttaa selventämään hedelmättömyyden syitä.

Spermatogeneesi on kivesten siementiehytputkissa tapahtuva erittäin monimutkainen kolmivaiheinen prosessi, jossa sukusolut mitoottisen sekä meioottisen jakautumisen myötä erilaistuvat kantasolusta siittiöksi. Luotettavaa menetelmää sukusolujen erilaistamiseksi maljalla ei toistaiseksi ole kehitetty, joten sukusoluissa tapahtuvien biologisten mekanismien tutkimiseksi tarvitaan kudoksesta eristettyjä eläviä soluja sekä menetelmiä eri solupopulaatioiden erottelemiseksi.

MDR –protokolla on Turun yliopiston tutkimusryhmän kehittämä menetelmä hiiren sukusolujen tiettyjen kehitysvaiheiden erottelemiseksi sekä keräämiseksi kiveksestä. Pyrkimyksenä oli kehittää edullinen ja yksinkertainen menetelmä tutkijoille, jotka työskentelevät spermatogeneesin parissa. Menetelmä suunniteltiin niin, että protokollan voi suorittaa ilman investointeja useasti kalliisiin laitteistoihin. Tämän opinnäytetyön tarkoitus on keskittyä kyseisen MDR-menetelmän optimointiin.

Male infertility is steadily increasing in western societies. In many recent studies quality and count of sperm has been proven to fall and is still declining. To address the problem of infertility, a better understanding of spermatogenesis and processes related to gene regulation is needed.

Spermatogenesis is very complex process that occurs in the semineferous tubules of the testes. The process occurs in three phases, where germ cells proliferate through mitotic and meiotic divisions into haploid spermatozoa. At the moment there is no reliable cell culture method for male germ cell differentiation in vitro. Hence studying the process of spermatogenesis, living cells freshly isolated from testes as well as methods to separate the different cell populations are needed.

MDR –protocol is a method to isolate and collect germ cells in different phases of maturation from mouse testes. This method is developed by the Turku University’s research team. The aim was to develop a simple and inexpensive method for scientists working in the field of spermatogenesis. The main idea was that no investment for expensive apparatus is needed. Only centrifuge and basic lab supplies are needed. The purpose of this thesis is to further optimize the MDR-protocol.