Raudan imeytymiseen vaikuttavien proteiinien immunovärjäyksen optimointi

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Tampereen yliopiston Keliakiatutkimuskeskukselle. Opinnäytetyön tavoitteena oli optimoida kolmen eri vasta-aineen A, B ja C immunohistokemialliset värjäysprotokollat parafiinileikkeille anemiaan ja keliakiaan liittyvää tutkimusta varten. Tarkoituksena oli suorittaa immunovärjäyksiä parafiinileikkeille ja arvioida niiden värjäytymisen laatua mikroskopoimalla sekä tehdä värjäytymistä parantavia muutoksia protokolliin. Protokollat pohjautuivat yleisiin parafiinileikkeiden immunovärjäystekniikoihin. Käytettyjen vasta-aineiden nimet on poistettu julkisesta raportista salassa pidettävien tietojen takia.

Opinnäytetyössä saatiin optimoitua kaikkien kolmen vasta-aineen värjäysprotokollat ja suoritettua värjäykset kaikille näytteille. Vasta-aine A:lle suoritettiin kolme kokeilua, B:lle neljä ja C:lle kuusi, joiden jälkeen vasta-aineen sitoutumiskohdan ja saadun värin voimakkuuden perusteella protokollat todettiin optimoiduiksi. Optimoiduilla protokollilla värjättiin 37 potilaan ja kontrollien näytesarja.

Saatuja tuloksia käytetään tutkimuksessa keliakiasta ja anemiasta. Optimoituja protokollia ja niiden tuloksia tullaan hyödyntämään Keliakiatutkimuskeskuksen tutkimuksissa. Jatkotutkimusehdotuksena olisi testata optimoitujen protokollien toistettavuutta toisilla potilasnäytteillä.

This thesis was done for the Celiac Disease Research Center of the University of Tampere, as a part of an ongoing study about celiac disease and anemia. The objective was to optimize the protocols for immunohistochemical staining of paraffin-embedded tissue sections for three different antibodies A, B and C. The purpose was to conduct immunostaining of the paraffin-embedded tissue sections of small intestine, to evaluate the quality of staining by microscope, and to make alterations to achieve better staining quality. The protocols were based on common techniques used in immunostaining for the paraffin-embedded tissue sections. Names of antibodies were excluded from the public version of this thesis for confidential reasons.

The optimization of protocols for all three antibodies was successful, and immunostainings were done for all of the tissue section samples. Three protocol tests were done for antibody A, four tests for B and six for C. After the testing, the optimal protocols were chosen on basis of staining quality: the binding position of the antibody and the intensity of staining. The control samples and 37 samples from patients were stained using the optimized protocols.

The results of immunostaining are used in the study focusing on the connection between celiac disease and anemia. The optimized protocols and their results can be used in the forthcoming studies at the Celiac Research Center. For further research the repeatability of the optimized staining protocols should be examined.