DNaasikontaminaation määritysmenetelmän karakterisointi

Abstract

Opinnäytetyön toimeksiantaja oli Wallac Oy, jonka tiloissa Turussa opinnäytetyön kokeellinen osuus suoritettiin. Vuonna 2018 Wallac sai projektin, jonka tarkoituksena oli validoida liuosvalmistusprosessi uusille tuotettaville liuoksille. Yhtenä projektin tuotteena muodostuu DNA:n pesuliuosta, jolle todettiin tarvittavan liuoksessa mahdollisesti olevaa DNaasia kvalitoiva laadunvalvontamenetelmä.

Opinnäytetyön tavoitteena oli osoittaa kaupallisen DNaseAlert QC System -kitin sopivuus DNaasien havaitsemiseen DNA:n pesuliuoksessa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli karakterisoida DNaseAlert QC System -kitin käyttäytymistä ja ominaisuuksia valituilla parametreilla. Karakterisoinnin parametreiksi valittiin validointiparametreja, mutta karakterisointi ei noudata validoinnin etenemistä. Tarkoituksena oli myös selvittää käytössä olevan Victor-kuoppalevynlukijan jo valmiiksi asennettujen filtterien yhteensopivuus kysei-sen menetelmän kanssa. Suoritettujen määrityksien pohjalta laadittiin yhteenveto ja karakterisointiraportti, joka hyväksytettiin Wallac Oy:n validoinnin ohjausryhmällä.

Opinnäytetyön tavoite ja tarkoitus toteutuivat karakterisointiraportin tullessa hyväksytyksi Wallac Oy:n validoinnin ohjausryhmässä. DNaseAlert QC System -kitti osoittautui toimivaksi kvalitatiiviseksi menetelmäksi DNaasikontaminaatioiden havaitsemiseksi DNA:n pesuliuoksessa. Karakterisointiraporttia käytettiin hyväksi menetelmän validoinnissa. Ongelmaksi opinnäytetyössä osoittautui DNaasi I -entsyymi sen muuttuessa hyvin nopeasti inaktiiviseksi standardilaimennoksen valmistuttua. Luottamuksellinen aineisto on poistettu julkisesta raportista.

The commissioner of this thesis was Wallac Oy and the experimental part of the thesis was carried out in Wallac Oy’s facilities in Turku. In year 2018 Wallac Oy received a project which aimed to validate a solution production process for new solutions to be made. One of the solutions to be made was a DNA wash solution for which a qualitative DNase quality control method was needed.

The purpose of this thesis was to show the suitability of DNaseAlertä QC System kit for detecting DNase in the DNA wash solution. The objective of this thesis was to characterize the behavior and qualities of the DNaseAlert QC System kit with chosen parameters. The parameters to characterize were validation parameters but the characterization did not follow the validation process. The objective was also to research the compatibility of the filters of Victor Multilabel Plate Reader with the method used. A summary and a characterization report were made of the results of the analysis run with the Victor. The characterization report was approved by the Wallac Oy Validation Steering Team.

The objectives and scope were reached as the characterization report was approved by the Wallac Oy Validation Steering Team. The DNaseAlertä QC System kit turned out to be a functional qualitative method for detecting DNase contamination in the DNA wash solution. The behavior of the DNase I enzyme proved to be problematic as it started to inactivate as the standard solution was made. Confidential material was omitted from the public report.