rProtein A Sepharose FF vasta-ainepuhdistuspylvään puhdistaminen : Cleaning-in-place (CIP)

Abstract

Työn tarkoituksena oli puhdistaa rProtein A Sepharose FF vasta-ainepuhdistuspylväs cleaning-in-place -menetelmällä (CIP). Työ tehtiin Wallac Oy:n vasta-ainevalmistuksen osastolle. Normaalin vasta-ainepuhdistuksen yhteydessä kromatografiapylväiseen kertyy epäpuhtauksia ja kontaminaatioita, jotka eivät välttämättä poistu pylväästä regeneroinnin aikana. Cleaning-in-place -puhdistusmenetelmällä pyritään poistamaan näitä epäpuhtauksia ja varmistamaan pylvään toimivuus. CIP-menetelmää testattiin anti-IRT 14F10 pylväällä. CIP-käsittelyn aikana kerättiin fraktioita, joista määritettiin mahdollisia pylvään epäpuhtauksia. Käsittelyn jälkeen suoritettiin normaali vasta-aine-erän puhdistus, ja puhdistetun vasta-aineen laadunvalvonta. Lisäksi varmistettiin, ettei CIP-käsittely ole vahingoittanut kromatografiapylvästä, tai ettei käsittely huononna puhdistuskapasiteettia. Testauksissa todettiin, että CIP-menetelmä ei vahingoita kromatografiapylvästä, eikä huonontanut puhdistuskapasiteettia. Puhdistetun vasta-aineen laadunvalvonnan avulla voidaan todeta, ettei CIP-menetelmä vaikuta lopputuotteen laatuun. Lisäksi testauksissa selvisi, että pylvään suurimmat epäpuhtaudet muodostuivat proteiineista, jotka saatiin poistettu CIP-käsittelyllä. Lopputuloksena voidaan todeta, että rProtein A Sepharose FF kromatografiapylväs voidaan puhdistaa cleaning-in-place -menetelmällä.

The aim of this thesis was to clean an rProtein A Sepharose FF antibody purification column by using the cleaning-in-place method (CIP). The thesis was commissioned by the antibody manufacturing department of Wallac Inc. During normal antibody purification, impurities and contaminants may accumulate in the chromatography column. These contaminants cannot necessarily be removed by the regeneration of the column. The idea is that the impurities and the contaminants can be removed by cleaning-in-place and at the same time the functionality of the column can be ensured. The CIP method was tested with an anti-IRT 14F10 column. Fractions were collected during the CIP. Possible impurities were then determined from the fractions. Next the CIP column was used to purify a normal antibody batch and regular quality control of the purified antibodies was performed. In addition, tests were carried out to make sure that the CIP method did not damage the chromatography column and to make sure that the method did not affect the purification capacity. It was found that the CIP did not damage the chromatography column, nor did it affect the purification capacity. It can be said that the method does not affect the final product. This was confirmed by the quality control of the purified antibodies. The tests showed that the majority of the impurities were proteins and the CIP method was able to remove them. As a conclusion it can be said that rProtein A Sepharose FF chromatography columns can be cleaned by the cleaning-in-place method.