Likvorin leukosyyttien mikroskooppisen erittelylaskennan tulosten vertailu TYKSLABissa

Abstract

Likvoria eli aivo-selkäydinnestettä tutkitaan selvitettäessä keskushermostoon liittyviä häiriötä tai sairauksia, kuten meningiittiä, tulehduksellisia tiloja, kasvaimia tai vuotoepäilyjä. Meningiiteissä todetaan syystä riippuen joko granulosyytti- (bakteerimeningiitti) tai lymfosyyttivaltainen (virusperäinen meningiitti) solumäärän lisääntyminen. MGG-värjätyistä sytosentrifuugivalmisteista solumorfologia on hyvin nähtävissä. Gram-värjätystä pisaravalmisteesta sen sijaan nähdään mahdolliset bakteerit, mutta solumorfologia ei ole yhtä hyvin tunnistettavissa kuin MGG-värjätyissä sytosentrifuugivalmisteissa. Tutkimuksen tarkoituksena oli vertailla kolmella eri menetelmällä saatuja likvorin leukosyyttien mikroskooppisten erittelylaskentojen tuloksia ja niiden eroja. Tutkimuksessa vertailtiin MGG- ja gram-värjättyjä sytosentrifuugivalmisteita keskenään sekä MGG-värjättyjä sytosentrifuugivalmisteita ja gram-värjättyjä pisaravalmisteita. Tavoitteena oli yhtenäistää hematologian ja päivystyslaboratorion menetelmät likvorin leukosyyttien mikroskooppisessa erittelylaskennassa. Likvorinäytteiden leukosyyttien mikroskooppinen erittelylaskenta suoritetaan eri menetelmin päiväaikana ja päivystysaikana. Päiväaikana näytteet valmistetaan käyttämällä sytosentrifuugimenetelmää ja MGG-värjäystä kun taas päivystysaikana näytteet valmistetaan käyttäen pisaramenetelmää ja gram-värjäystä. Päivystysaikana vastataan leukosyyttien mikroskooppisesta erittelylaskennasta granulosyytit ja mononukleaariset solut, jolloin vastaus leukosyyttien suhteellisista prosenttiosuuksista on aina 100 %. Päiväaikana tehdystä leukosyyttien mikroskooppisesta erittelylaskennasta lasketaan kaikki solut erikseen, jolloin myös monosyyttien suhteellinen prosenttiosuus lasketaan, mutta sitä ei kuitenkaan vastata. Tästä syystä leukosyyttien suhteelliset prosenttiosuudet eivät aina ole päiväaikana vastatuissa näytteissä yhteensä 100 %. Tähän pyritään saamaan muutosta, jotta vastaukset olisivat yhteneväisempiä. Tutkimuksen perusteella voidaan todeta, että käyttämällä sytosentrifuugimenetelmää molemmissa värjäyksissä, saadaan yhteneväisempiä tuloksia, sillä solumorfologia on helposti erotettavissa sytosentrifuugivalmisteessa. Todettiin myös, että nykyisiä menetelmiä käyttämällä saadaan jonkin verran yhteneväisempiä tuloksia, jos gram-värjätyistä pisaravalmisteista laskettaisiin granulosyyttien ja lymfosyyttien lisäksi muut solut (monosyytit) erikseen.

Cerebrospinal fluid is analysed to investigate disorders or diseases linked to the central nervous system such as meningitis, inflammatory conditions, tumours and haemorrhages. Depending on what causes the meningitis, multiplication of either granulocytes (bacterial meningitis) or lymphocytes (viral meningitis) is discovered. Cell morphology is easily spotted in MGG stained, cytocentrifuged preparations. In gram stained drop preparations, however, possible bacteria can be seen but the cell morphology is not as easily specified as in MGG stained cytocentrifuged preparations. The purpose of the research was to compare the results and differences of microscopic cell counts for leukocytes obtained by three different cell count techniques from cerebrospinal fluid. MGG and gram stained cytocentrifuged preparations were compared to one another as well as MGG stained cytocentrifuged preparations and gram stained drop preparations. The aim was to uniform the techniques used in hematology and on-call laboratory for counting leukocytes in cerebrospinal fluid samples. The leukocyte count for cerebrospinal fluid samples is carried out in different techniques during the day and on-call. During the day samples are prepared using the cytocentrifuge and MGG staining whereas during on-call the samples are prepared using the drop technique and gram staining. Whilst on-call the cell count result includes granulocytes and mononuclear cells, thus the proportion of leukocytes is always 100 %. During the day all the cells from the leukocyte count are specified and the proportion of monocytes is counted yet not mentioned in the results. This is why the proportion of leukocytes is not always 100 % in the results given during the day. Changes in the procedure are pursued in order to make the results more uniform. The research shows that more uniform results can be achieved by using the cytocentrifuge technique in both stainings as cell morphology is as easily spotted in a cytocentrifuge preparation. It also showed that using current techniques will result in somewhat more uniform results if other cells (monocytes) alongside granulocytes and lymphocytes were to be counted from the gram stained drop preparations as well.