Piilolinssien hoitonesteiden akantameba-aktiivisuuden määritysmenetelmän kehitys sekä hoitonesteiden tehokkuuksien vertailu

Abstract

Opinnäytetyön tarkoituksena oli kehittää Piiloset by Finnsusp Oy:n käyttöön sopiva menetelmä piilolinssien hoitonesteiden akantameba-aktiivisuuden määrittämiseen. Toistaiseksi virallista ISO-standardia tai vaatimuksia akantameba-aktiivisuudelle ei ole. Tavoitteena oli kehittää menetelmä uusien hoitonesteiden tuotekehitykseen jo ennen viranomaisten valmistelemaa standardimenetelmää. Lisäksi työn tarkoituksena oli vertailla yhdeksän kaupallisen tai vasta tuotekehityksessä olevien hoitonesteiden tehokkuuksia. Analysoitaviin hoitonesteisiin kuului toimeksiantajan omien kaupallisten ja tuotekehityksessä olevien hoitonesteiden lisäksi muita kaupallisia hoitonesteitä. Työn käytännön osuus suoritettiin Turun ammattikorkeakoulun mikrobiologian ja biotekniikan laboratorioissa.

Testimenetelmä kehitettiin kirjallisuudessa julkaistujen tutkimusten sekä aiheeseen liittyvien FDA:n kokouspöytäkirjojen perusteella. Menetelmällä pyrittiin simuloimaan tuotteiden oikeaa käyttöympäristöä. Analyysimenetelmän toimivuutta testattiin yhdellä hoitonestenäytteellä A. castellanii -akantameballa positiivisen- ja negatiivisen kontrollin lisäksi. Lopullisella alustavien testien jälkeen kehitetyllä menetelmällä analysoitiin yhdeksän hoitonesteen tehokkuudet kahdelle eri akantameballe (A. castellanii ja A. polyphaga). Hoitonesteiden tehokkuus arvioitiin subjektiivisesti jakamalla ne aktiivisuuden mukaan neljään luokkaan.

Kehitetty subjektiivinen analyysimenetelmä osoittautui toimivaksi, vaikka tarkkoja arvoja amebojen vähentymiselle ei saatu laskettua. Käytetyllä menetelmällä saatiin toisistaan poikkeavia tuloksia eri hoitonesteille. Testien aikana havaittiin eri akantameba-lajien ja -kantojen eroavan herkkyyksiltään toisistaan. Standardimenetelmän kehityksessä ongelmana tulee olemaan käytettävän akantameba-lajin ja kannan valinta. Sopiva akantamebojen säilytysaika, -olosuhteet ja uudelleensiirrostuksien lukumäärä ovat oleellisia selvittää, jotta akantamebat eivät herkisty käsittelyistä ja säilytyksestä liikaa pysyen siten mahdollisimman luonnollisina.

The purpose of this thesis was to develop a method to evaluate the disinfection efficacy of different contact lens care solutions against Acanthamoeba species for the use of Piiloset by Finnsusp Ink. So far, there are no official ISO standard or other requirements. The aim was to develop a method which could be used in product development already before the standard method is available. A further aim was to compare the disinfection efficacy of different contact lens care solutions against the Acanthamoeba species. There were nine different contact lens care solutions in the study. Some of the analyzed solutions were produced by the commissioner and either commercial or under development. Some other commercial solutions were studied, too. The practical part of this project was performed in microbiology and biotechnology laboratories of Turku University of Applied Sciences.

The testing method was developed on the grounds of previous publications and FDA minutes. The testing method aspired to simulate the real conditions of use of the product. The analysis was tested for one Acanthamoeba species (A. castellanii) with one contact lens care solution and with positive and negative controls. After performance tests, nine contact lens care solutions were analyzed for two Acanthamoeba species (A. castellanii and A. polyphaga) using the final method. The efficiency of the contact lens care solutions was evaluated subjectively, grouping the solutions into four categories based on efficiency.

The developed subjective method proved to be functional although the exact reduction of Acanthamoeba was hard to determine. Diverging results were obtained for different solutions. During the tests it was observed that different Acanthamoeba species and strains had different sensitivities to disinfectants. In the development of a standard method, the choice of Acanthamoeba species or strain will present a problem. It is essential to determine a suitable curing period, curing conditions and number of reinoculations to prevent excessive sensitization of the Acanthamoeba species during handling and storage. Correct handling and storage will keep the amoebas as natural as possible.