Oligomeerisen ellagitanniinin puhdistaminen ja rakenteen tutkiminen massaspektrometrialla
Manninen, Ville-Pekka (2020)
Manninen, Ville-Pekka
2020
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2020051511670
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2020051511670
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö käsittelee oligomeerisia ellagitanniineja, jotka ovat kasvin sekundäärisen metabolian tuotteita. Tanniinit ovat monimutkaisin polyfenolisten yhdisteiden luokka ja niillä on esimerkiksi kyky liittyä proteiiniin. Tutkittu oligomeerinen ellagitanniini oli oenoteiini B, joka on dimeerinen makrosyklinen yhdiste.
Opinnäytetyön tavoitteena oli puhdistaa kasvinäytteestä uutettua oenoteiini B:tä sekä tutkia sen rakennetta. Puhdistamiseen käytettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa. Preparatiivista kromatografiaa käytettiin ensin karkeaan puhdistamiseen, jonka jälkeen semipreparatiivista kromatografiaa tarkempaan puhdistamiseen. Puhdistamisen jälkeen näytteet analysoitiin erittäin korkean erotuskyvyn nestekromatografian avulla yhdistettynä diodirividetektoriin (UPLC-DAD), jolla saatiin näytteille kromatogrammit. Kromatogrammeista määritettiin näytteiden puhtaus sekä laskettiin puhtausprosentti. Puhtaan oenoteiini B -näytteen rakenne analysoitiin massaspektrometrilla. Käytetty massaspektrometri oli tandemmassaspektrometri, jossa oli kvadrupoli ja orbiloukku yhdistettynä. Chemdraw- ohjelman fragmentointityökalun ja massaspektrien avulla muodostettiin fragmenteille rakenteita.
Opinnäytetyön tulosten perusteella saadut oenoteiini B näytteet olivat hyvin puhtaita. Puhdasta oenoteiini B:tä eristettiin yhteensä 1 g. In this thesis, oligomeric ellagitannins were used, which are secondary metabolites of plants. Tannins are the most complicated class of polyphenolic compounds and have, for example, an ability to bind with proteins. The Studied oligomeric ellagitannin was oenothein B, which is a dimeric macrocyclic compound.
The objective of this thesis was to purify oenothein B from an extracted plant sample and to study its structure. High-performance liquid chromatography was used for purification. First, coarse purification was conducted with preparative chromatography, followed by semipreparative chromatography for more precise purification. After that, the samples were analysed with an ultra-high-performance liquid chromatograph coupled with a diode-array detector (UPLC-DAD) to obtain chromatograms for the samples. From the chromatograms, the purity of the samples and the purity percentage could be calculated. The structure of the pure oenothein B sample was analysed with a mass spectrometer. The mass spectrometer was a tandem mass spectrometer which had a quadrupole coupled with an Orbitrap. With the Chemdraw fragmentation tool and the mass spectra measured, structures for the fragments could be formed.
Based on the results of the thesis, the obtained oenothein B samples were very pure. A total amount of 1 g of pure oenothein B was obtained.
Opinnäytetyön tavoitteena oli puhdistaa kasvinäytteestä uutettua oenoteiini B:tä sekä tutkia sen rakennetta. Puhdistamiseen käytettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa. Preparatiivista kromatografiaa käytettiin ensin karkeaan puhdistamiseen, jonka jälkeen semipreparatiivista kromatografiaa tarkempaan puhdistamiseen. Puhdistamisen jälkeen näytteet analysoitiin erittäin korkean erotuskyvyn nestekromatografian avulla yhdistettynä diodirividetektoriin (UPLC-DAD), jolla saatiin näytteille kromatogrammit. Kromatogrammeista määritettiin näytteiden puhtaus sekä laskettiin puhtausprosentti. Puhtaan oenoteiini B -näytteen rakenne analysoitiin massaspektrometrilla. Käytetty massaspektrometri oli tandemmassaspektrometri, jossa oli kvadrupoli ja orbiloukku yhdistettynä. Chemdraw- ohjelman fragmentointityökalun ja massaspektrien avulla muodostettiin fragmenteille rakenteita.
Opinnäytetyön tulosten perusteella saadut oenoteiini B näytteet olivat hyvin puhtaita. Puhdasta oenoteiini B:tä eristettiin yhteensä 1 g.
The objective of this thesis was to purify oenothein B from an extracted plant sample and to study its structure. High-performance liquid chromatography was used for purification. First, coarse purification was conducted with preparative chromatography, followed by semipreparative chromatography for more precise purification. After that, the samples were analysed with an ultra-high-performance liquid chromatograph coupled with a diode-array detector (UPLC-DAD) to obtain chromatograms for the samples. From the chromatograms, the purity of the samples and the purity percentage could be calculated. The structure of the pure oenothein B sample was analysed with a mass spectrometer. The mass spectrometer was a tandem mass spectrometer which had a quadrupole coupled with an Orbitrap. With the Chemdraw fragmentation tool and the mass spectra measured, structures for the fragments could be formed.
Based on the results of the thesis, the obtained oenothein B samples were very pure. A total amount of 1 g of pure oenothein B was obtained.