Parhaiten soluviljelyä tehostavan reagenssin löytäminen eri valmistajien hiiren alkion ihon fibroblastisoluista, mitomysiini c:stä ja fibroblasti-kasvutekijöistä

Abstract

Soluteknologia, jossa käytetään uudelleenohjelmoituja kantasoluja eli iPS-soluja (indused Pluripotent Stem cells), on luonut uusia mahdollisuuksia kantasolututkimukseen. iPS-soluteknologian avulla voidaan tuottaa potilasspesifisiä monikykyisiä kantasolulinjoja, joista voidaan tuottaa elimistön eri solutyyppejä. iPS-soluja voidaan ylläpitää erilaisilla viljelymenetelmillä. Hiiren alkion ihon fibroblastisolujen –viljelymallissa, solut kasvavat yhdessä hiiren alkion ihon fibroblastisolujen eli MEF-solujen (Mouse Embryonic Fibroblasts) kanssa. Viljelymallissa MEF-solujen tehtävänä on ylläpitää iPS-solujen pluripotenttisuutta. Ennen kuin MEF-solut voivat ylläpitää iPS-solujen pluripotenttisuutta, tulee ne inaktivoida eli saada jakautumiskyvyttömiksi esimerkiksi mitomysiini C:n avulla. Pluripotenttisuutta ylläpidetään myös fibroblasti-kasvutekijöiden avulla.

Opinnäytetyön tavoitteena oli löytää eri valmistajien reagensseista parhaiten soluviljelyä tehostavat reagenssit, jotka sopisivat tutkimusryhmän käyttämille solulinjoille. Tutkimuksessa testattiin eri valmistajien MEF-soluja, mitomysiini C:tä ja fibroblasti-kasvutekijää. MEF-solujen ja fibroblasti-kasvutekijän vaikutuksia soluviljelyyn tutkittiin kahden solulinjan avulla. Mitomysiini C:n vaikutuksia tutkittiin inaktivoimattomilla MEF-soluilla. Tutkimuksessa eri tuotteiden vaikutuksia soluviljelyn tehokkuuteen arvioitiin morfologisten ja immunovärjäystulosten perusteella.

Eri valmistajien reagenssit vaikuttivat solulinjoihin hyvin eri tavalla. Saadut tulokset soluviljelyn tehokkuuteen eri valmistajien reagenssien välillä olivat hyvin selkeät. Toiset tuotteet aiheuttivat soluviljelmiin runsaasti erilaistunutta iPS-solukasvustoa ja toiset valmisteet saivat aikaan soluviljelmissä solukolonioiden hyvän kasvun, jossa oli hyvin vähän erilaistunutta solukasvustoa.

iPS-technology (induced Pluripotent Stem cells) has created new possibilities for stem cell research. When patient specific stem cell lines are available, all kinds of cells that can be found in human body can be produced. These iPS cells can be maintained in a different kind of cell culture methods. In the culture method where mouse fibroblast cells (MEF-cells) are used, iPS cells are growing with the MEF-cells. These MEF-cells maintain the iPS cells´ pluripotency. Before MEF-cells can maintain the pluripotency of iPS cells, they must be inactivated, for examble, by mitomycin C. Pluripotency is also maintained with fibroblast growing factors. The goal of this Bachelor thesis was to find the best product to accelerate cell culture of different companies and to find the product that is suitable for heart group cell lines. Different companies´ mouse embryonic fibroblast cells, mitomycin C and fibroblast growth factor were tested. When MEF-cells and fibroblast growth factor were tested two cell lines were used. When mitomycin C was tested, inactivated MEF-cells were used. The results of morphology and immunostaining were used when testing products. Different kinds of results of the effects of different product on cell culture were achieved. The results were clear, some products caused plenty of differentiated iPS-cell growth and really bad growth in the cell culture some products caused good growth in the cell culture.