Mikro-RNA:t luuta muodostavan solun säätelyssä
Tuori, Anni-Mari (2014)
Tuori, Anni-Mari
Turun ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405218945
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405218945
Tiivistelmä
Luuytimen mesenkymaaliset strooman solut ovat monikykyisiä soluja, jotka erilaistuvat meso-dermin sukuperäissoluiksi; osteoblasteiksi eli luunemosoluiksi, kondrosyyteiksi eli rustosoluiksi ja adiposyyteiksi eli rasvasoluiksi. Mikro-RNA:t ovat pieniä, ei koodaavia RNA:ita, jotka ovat mukana useissa solujen toiminnoissa kuten kasvussa ja erilaistumisessa. Viime vuosina on löydetty mikro-RNA:ita, jotka ovat mukana mesenkymaalisen strooman solun erilaistumisessa luuta muodostavaksi osteoblastiksi. Mikro-RNA:t voivat tulevaisuudessa olla oiva työkalu luuta muodostavien solujen säätelyssä esimerkiksi ortopedian käyttötarkoituksiin.
Tämän opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia mikro-RNA:n säätelyn vaikutusta geenimuunnellun hiiren mesenkymaalisen strooman solun erilaistumisessa luuta muodostavaksi soluksi eli os-teoblastiksi. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää onko mikro-RNA:n inaktivoinnilla vaiku-tusta geenimuunnellun hiiren mesenkymaalisen strooman solun erilaistuessa osteoblastiksi. Tutkimuksessa käytettiin kahden eri geenimuunnellun hiirikannan (cre+ ja cre-) luuytimestä eristettyjä mesenkymaalisen strooman soluja. Geenimuokkausten lopputuloksena mikro-RNA:n tuotto voitiin lopettaa toisen hiirilinjan (cre+) luutamuodostavissa soluissa tamoksifeenin avulla. Tamoksifeeni on estrogeenitoimintaa moduloiva rintasyövän hoidossa käytettävä lääkeaine. Sille on kehitetty geenimuunneltu muoto. Luuydinsoluja viljeltiin soluviljelylaboratoriossa tamok-sifeenin vaikutuksen alaisena ja ilman tamoksifeenin vaikutusta. Solujen viabiliteettia havainnoi-tiin mikroskoopilla sekä erilaisin värjäyksin ja mittauksin.
Tuloksissa tamoksifeenin vaikutuksen alla olleet naarashiirten solut erilaistuivat huomattavasti nopeammin kuin naarashiirten solut, joille ei annosteltu tamoksifeenia. Tämä osoitettiin myös ALP-proteiinimittauksessa, jossa huomattiin, että tamoksifeenin vaikutuksen alla olleet naa-rashiirten solut erittivät erilaistumiseen vaadittavia proteiineja huomattavasti aikaisemmin kuin solut, joille ei oltu annosteltu tamoksifeenia. Toisten kasvatuksien uroshiirten solujen kohdalla ei samanlaista huomattavaa eroa nähty. Tutkimus kuitenkin osoitti, että mikro-RNA:n inaktivoinnilla tamoksifeenin avulla saattaa olla vaikutusta osterix positiivisen (cre+) solun erilaistumisessa luuta muodostavaksi soluksi. Vaikutus saattaa olla nopeampaa naarashiiristä eristetyillä soluilla kuin uroshiirten soluilla.
Tämän opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia mikro-RNA:n säätelyn vaikutusta geenimuunnellun hiiren mesenkymaalisen strooman solun erilaistumisessa luuta muodostavaksi soluksi eli os-teoblastiksi. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää onko mikro-RNA:n inaktivoinnilla vaiku-tusta geenimuunnellun hiiren mesenkymaalisen strooman solun erilaistuessa osteoblastiksi. Tutkimuksessa käytettiin kahden eri geenimuunnellun hiirikannan (cre+ ja cre-) luuytimestä eristettyjä mesenkymaalisen strooman soluja. Geenimuokkausten lopputuloksena mikro-RNA:n tuotto voitiin lopettaa toisen hiirilinjan (cre+) luutamuodostavissa soluissa tamoksifeenin avulla. Tamoksifeeni on estrogeenitoimintaa moduloiva rintasyövän hoidossa käytettävä lääkeaine. Sille on kehitetty geenimuunneltu muoto. Luuydinsoluja viljeltiin soluviljelylaboratoriossa tamok-sifeenin vaikutuksen alaisena ja ilman tamoksifeenin vaikutusta. Solujen viabiliteettia havainnoi-tiin mikroskoopilla sekä erilaisin värjäyksin ja mittauksin.
Tuloksissa tamoksifeenin vaikutuksen alla olleet naarashiirten solut erilaistuivat huomattavasti nopeammin kuin naarashiirten solut, joille ei annosteltu tamoksifeenia. Tämä osoitettiin myös ALP-proteiinimittauksessa, jossa huomattiin, että tamoksifeenin vaikutuksen alla olleet naa-rashiirten solut erittivät erilaistumiseen vaadittavia proteiineja huomattavasti aikaisemmin kuin solut, joille ei oltu annosteltu tamoksifeenia. Toisten kasvatuksien uroshiirten solujen kohdalla ei samanlaista huomattavaa eroa nähty. Tutkimus kuitenkin osoitti, että mikro-RNA:n inaktivoinnilla tamoksifeenin avulla saattaa olla vaikutusta osterix positiivisen (cre+) solun erilaistumisessa luuta muodostavaksi soluksi. Vaikutus saattaa olla nopeampaa naarashiiristä eristetyillä soluilla kuin uroshiirten soluilla.