Proteiinien puhdistus kaksifaasiuutolla hydrofobiini-proteiinin avulla
Vuorenalanen, Jenna-Miia (2014)
Vuorenalanen, Jenna-Miia
Turun ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405218930
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405218930
Tiivistelmä
Kaksifaasiuuttomenetelmät ovat vaihtoehto teollisuusmittakaavan proteiinien puhdistuksessa. Ne ovat edullisempia ja helpompia kuin monet perinteisesti käytetyt menetelmät. Vesi-detergenttikaksifaasiuuttoa on aikaisemmin käytetty hydrofobisten proteiinien puhdistuksessa, mutta viime aikoina on tutkittu mahdollisuutta käyttää menetelmää myös muiden proteiinien puhdistuksessa. Liittämällä kohdeproteiineihin pieni ja hydrofobinen hydrofobiini-niminen proteiini saadaan syntynyt fuusioproteiini puhdistettua käyttämällä vesi-detergenttikaksifaasiuuttoa.
Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia kahden eri hydrofobiinin sisältävän fuusioproteiinin puhdistusta vesi-detergenttikaksifaasiuutolla. Tutkittavat fuusioproteiinit olivat lakkaasi-HFBI ja GOX-HFBI (glukoosioksidaasi-HFBI). Proteiineille suoritettiin uuttokokeita ja GOX-HFBI:n puhdistuksessa testattiin myös pH:n vaikutusta puhdistustulokseen. Opinnäytetyössä perehdyttiin myös lakkaasi-HFBI:n entsyymiaktiivisuusmääritystapoihin ja tutkittiin mahdollisuutta käyttää lämpökäsittelyä esipuhdistusmenetelmänä lakkaasi-HFBI:n puhdistuksessa.
Tehtyjen testien perustella GOX-HFBI siirtyi vesi-detergenttikaksifaasiuutossa osittain detergenttirikkaaseen faasiin. Mediumnäytteellä saanto oli 26 % ja lysaattinäytteellä 39 %. Menetelmä vaatii kuitenkin vielä optimointia ennen kuin sitä voidaan käyttää puhdistuksessa isommassa mittakaavassa. Lakkaasi-HFBI:n ei havaittu siirtyvän detergenttirikkaaseen faasiin. Tämä voi selittyä mahdollisella fuusioproteiinin hajoamisella ennen uuttovaihetta.
Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia kahden eri hydrofobiinin sisältävän fuusioproteiinin puhdistusta vesi-detergenttikaksifaasiuutolla. Tutkittavat fuusioproteiinit olivat lakkaasi-HFBI ja GOX-HFBI (glukoosioksidaasi-HFBI). Proteiineille suoritettiin uuttokokeita ja GOX-HFBI:n puhdistuksessa testattiin myös pH:n vaikutusta puhdistustulokseen. Opinnäytetyössä perehdyttiin myös lakkaasi-HFBI:n entsyymiaktiivisuusmääritystapoihin ja tutkittiin mahdollisuutta käyttää lämpökäsittelyä esipuhdistusmenetelmänä lakkaasi-HFBI:n puhdistuksessa.
Tehtyjen testien perustella GOX-HFBI siirtyi vesi-detergenttikaksifaasiuutossa osittain detergenttirikkaaseen faasiin. Mediumnäytteellä saanto oli 26 % ja lysaattinäytteellä 39 %. Menetelmä vaatii kuitenkin vielä optimointia ennen kuin sitä voidaan käyttää puhdistuksessa isommassa mittakaavassa. Lakkaasi-HFBI:n ei havaittu siirtyvän detergenttirikkaaseen faasiin. Tämä voi selittyä mahdollisella fuusioproteiinin hajoamisella ennen uuttovaihetta.