Tks5-proteiinin ja Ca2+-kanavien välisen yhteyden tutkiminen immunofluoresenssin avulla

Abstract

Opinnäytetyö toteutettiin Sari Tojkanderin tutkimusryhmässä Tampereen yliopiston Lääketieteen ja terveysteknologian tiedekunnassa. Ryhmä tutkii aktiinipohjaisten rakenteiden muuntumista syöpäsoluissa ja sitä, kuinka ne voivat edesauttaa syöpäsolujen liikettä kudoksissa.

Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia Tks5-proteiinin ilmenemistä Ca2+-kanavien aktiivisuuden kautta. Työssä vertailtiin Tks5 proteiinin ilmenemistä soluissa, joiden Ca2+-kanavien toimintaa oli manipuloitu geenimutaation ja kemikaalikäsittelyjen avulla. Kokeellinen osuus sisälsi soluviljelyä, immunofluoresenssivärjäyksiä ja kuvantamista fluoresenssimikroskoopilla. Analyysi suoritettiin laskemalla fluoresenssikuvien perusteella, kuinka suuressa osassa soluista Tks5-proteiinia ilmenee.

Tuloksien perusteella havaittiin, että TRPV4-geenin inaktivaatio laski Tks5-proteiinin määrää MCF10A-soluissa. 184A1-solulinjan soluja käsiteltiin erilaisilla Ca2+ -kanaviin vaikuttavilla aineilla, mutta niiden yhteys Tks5:n ilmenemiseen jäi epäselväksi.

This thesis was carried out in Sari Tojkander’s research group in Tampere University’s Faculty of Medicine and Health Technology. The aim of the research group is to investigate the transformation of actine-based structures in cancer cells and how they assist their movement in the tissues.

The purpose of the thesis was to study the expression of Tks5-protein through the Ca2+-channel activity. The aim of the work was to compare the appearance of Tks5 in cells in which Ca2+ activity was manipulated by a genetic modification and different chemical treatments. The experimental part of the thesis included cell culturing, immunofluorescence staining and fluorescence imaging. The analysis was carried out by counting the number of cells containing Tks5 in the fluorescence pictures.

The results suggested that TRPV4-gene inactivation lowers the amount of Tks5-protein detected in MC10A1-cells. 184A1 –cells were treated with different chemicals affecting the Ca2+ channels, but their connection to Tks5 expression remained unclear.