Vaseliinipohjaisen diltiatseemilääkevoiteen HPLC-analyysimenetelmän validointi

Abstract

Opinnäytetyön tavoitteena oli validoida menetelmä vaseliinipohjaiselle diltiatseemilääkevoiteelle erittäin korkean erotuskyvyn nestekromatografialla (UHPLC). Kokeellinen osuus suoritettiin Yliopiston Apteekin analyyttiseen laboratorioon, joka toimii yrityksen oman lääkevalmistusosaston laadunvarmistajina.

Diltiatseemi kuuluu kalsiumkanavan salpaajiin, eli sitä käytetään lääketieteessä kalsiuminestäjänä. Kalsiumkanavan salpaajia on käytetty yleisesti sydän- ja verisuonisairauksien hoitoon. Diltiatseemin pitoisuutta lääkevoiteessa voidaan analysoida korkean erotuskyvyn nestekromatografialla. Analyysimenetelmän kehittämiseen tarvitaan pätevä diltiatseemihydrokloridi in-house -standardi, josta valmistetaan analysointiin tarvittavat standardit. Diltiatseemin pääasiallinen hajoamistuote on desasetyylidiltiatseemi.

Validointi suoritettiin validointisuunnitelman mukaan, joka pohjautui ICH:n ohjeeseen ”Validation of Analytical procedures: Text and Methodology Q2”. Käytössä ollut menetelmä pohjautuu Euroopan farmakopean monografian diltiatseemin raaka-aineen sukulaisaineiden testin HPLC-menetelmään. Validoinnin tarkoituksena oli analysoida seuraavia parametrejä: systeemin soveltuvuus, kvantitointi- ja detektointiraja, lineaarisuus epäpuhtaustasolla, lineaarisuus, spesifisyys ja hajotuskokeet, oikeellisuus (saantokokeet) sekä toistettavuus. Lisäksi työn tarkoituksena oli selvittää hajotuskokeiden avulla lääkevoiteen säilyvyyttä eli sitä, kuinka kauan diltiatseemi säilyy lääkevoiteessa hyvänä ennen kuin se alkaa hajota. Hajotuskokeista selvisi, että diltiatseemi on herkästi hajoavaa happo- ja emäshajotuksissa. Lisäksi diltiatseemi hajosi myös hapettavissa olosuhteissa sekä Deconex-pesuaineliuoshajotuksessa.

Diltiatseemilääkevoiteen nestekromatografinen menetelmä saatiin validoitua kaikkien suunniteltujen parametrien suhteen, ja kaikki suoritetut kokeet täyttivät vaatimukset. Validoitu HPLC-menetelmä todettiin lineaariseksi, tarkaksi, toistettavaksi sekä riittävän herkäksi. Lisäksi menetelmää voidaan pitää sopivana diltiatseemin pitoisuusmääritykseen lääkevoiteesta.

The purpose of this thesis was to validate a method for vaselin-based diltiazem ointment using ultra-high performance liquid chromatography. The experimental part was conducted at the analytical laboratory of the University Pharmacy, which serves as the quality assurers for their own pharmaceutical manufacturing department.

Diltiazem belongs to the calcium channel blockers, thus it is used in medicine as a calcium antagonist. Calsium channel blockers have been commonly used in the treatment of cardiovascular diseases. The concentration of diltiazem in the ointment can be analysed using ultra-high performance liquid chromatography. Developing the analysis method requires a valid diltiazem hydrochloride In-House standard, from which the necessary standards for analysis are prepared. The main degradation product of diltiazem is desacetyldiltiazem.

Validation was carried out according to a validation plan based on the ICH guideline “Validation of Analytical procedures: Text and Methodology Q2”. The method used is based on the HPLC method of the European Pharmacopeia monograph diltiazem raw material related test. The purpose of the validation was to analyse the following parameters: system suitability, detection and quantification limit, linearity at the impurity level, linearity, specificity and dispersal tests, accuracy and precision. In addition, the aim of the work was to use decomposition tests to determine the shelf life of the drug ointment, which means how long the diltiazem remain in the good drug ointment before it begins to decompose. Dispersion tests showed that diltiazem is sensitive to decomposition in acid and base. In addition, diltiazem also decomposed under oxidate conditions as well as deconex detergent solution decomposition.

The liquid chromatographic method for the diltiazem ointment was successfully validated in terms of all planned parameters, and all conducted experiments met the requirements. The validated HPLC method was found to be linear, accurate, repeatable, and sufficiently sensitive. In addition, the method can be considered suitable for the determining the concentration of diltiazem in the medicinal ointment.