Diagnostics of tissue TG2 autoantibodies and potential celiac disease : in service lab of Celiac Disease Research Center at Tampere University

Abstract

Tampereen yliopiston Keliakiatutkimuskeskuksessa toimii maksupalvelulaboratorio, joka tarjoaa keliakian diagnostisia tutkimuksia terveydenhuollon ja tutkijoiden käyttöön. Diagnostiikkaa toteutetaan tutkimuspotilaiden seerumista, plasmasta ja ohutsuolen limakalvon koepaloista.

Maksupalvelulaboratorio hyödyntää tutkimuksissaan vasta-aineiden toimintaan perustuvia menetelmiä. Näistä keliakialle tyypillistä autovasta-ainetta, transglutaminaasi 2:ta, (TG2), mitataan kaupallisella EliaTM Celikey immunoanalyysillä. Lisäksi alkavaa, potentiaalista keliakiaa tutkitaan immunohistologisilla kudosvärjäyksillä, joissa hyödynnetään immunofluoresenssia ja peroksidaasivärjäystä TG2-spesifisten IgA kertymien, sekä ohutsuolen limakalvon epiteelin tulehdussolutyyppien määrittämiseksi.

Opinnäytetyön tarkoituksena oli toteuttaa ja hallita maksupalvelulaboratorion menetelmäkokonaisuudet ja raportoida ne käsikirjan omaisessa muodossa Tampereen Keliakiatutkimuskeskukselle. Kuuden viikon käytännönjakson aikana mitattiin 1000 plasmanäytettä sekä valmistettiin useasta suolipalasta potentiaalisen keliakian värjäyspaneeli patologista tutkimusta varten.

Opinnäytetyö kokoaa yhteen suoritettaviin tutkimuksiin liittyvän, tietokannassa olevan informaation keliakiasta, käytettyjen menetelmien toimintaperiaatteet, sekä laboratoriohenkilökunnan hiljaisen tietotaidon, päivittää reagenssit ja työnkulun käytännöt sekä kuvailee menetelmien lopputuleman kirjalliseksi manuaaliksi. Tästä hyötyvät tutkimuskeskuksen tutkijat ja laboratorion henkilökunta. Opinnäytetyö palvelee perehdyttämistä, kouluttamista, itseohjautuvuutta ja oppimateriaalina. Tutkimustulosten analyysit ja tulkinta on rajattu opinnäytetyön ulkopuolelle.

In the Celiac Disease Research Center (CeliRes) at Tampere University operates a service lab, which provides celiac diagnostics for healthcare and research purposes. The diagnostics utilize patient serum, plasma and biopsy specimens from the small intestinal mucosa as a study material.

The service lab applies antibody-based methodologies in celiac analyses. The celiac disease, (CeD), autoantibody against transglutaminase 2, (TG2), is measured using the commercial EliA™ Celikey immunoassay. Also, early stage, potential form of the disease is investigated using immunohistochemical approaches. These methods employ immunofluorescence and peroxidase staining to detect mucosal TG2-specific IgA deposits and to characterize inflammatory cell subtypes (IELs) within the duodenal epithelium.

The aim of the thesis was to carry out and master the diagnostic methodologies applied in the service lab and report the entities in the format of a handbook for CeliRes use. During the six-weeks period, 1000 plasma samples were analyzed, and marker panels for pathological examination of potential celiac disease were stained from several suspected celiac biopsy specimens.

The thesis summarizes the background information regarding celiac disease, and the principles of the applied methodologies, clears up the hidden know-how gathered by the laboratory personnel, updates materials and workflows and reports the outcomes of the techniques. This manual benefits the CeliRes personnel in briefing, educating and self-imposed training on diagnostics used in service lab. The analysis and interpretation of the results were delineated outside of the thesis.