Kahden spermanpesumenetelmän vertailu : siittiöiden määrä ja morfologian vertailu

Abstract

Vuonna 2012 TYKS Naistentautien Fertiliteettilaboratoriossa oli yhteensä 3698 potilaskontaktia, joista 468 oli inseminaatio-, IVF- ja ICSI-hoitoja. Ennen hedelmöityshoitomuodon valitsemista tutkitaan sperman laatu sperma-analyysin avulla. Sperman laadun tärkeimpiä osoittimia ovat siittiöiden määrä miljoonina millilitrassa, liike sekä morfologinen määritys, jossa katsotaan siittiöiden pään, keskikappaleen ja hännän epämuodostuneisuutta. Morfologialla on todettu olevan yhteys sperman laatuun ja siittiöiden kykyyn hedelmöittää munasolu. Sperma-analyysin jälkeen, ennen jokaista hedelmöityshoitoa, spermanäyte pestään. Pesun tarkoituksena on erottaa parhaiten liikkuvat siittiöt siemenplasmasta ja kuolleista siittiöistä. Käytetyimpiä pesumenetelmiä ovat gradienttisentrifugointi- ja swim-up- pesumenetelmä. Gradientti-sentrifugointimenetelmässä liikkuvat siittiöt sentrifugoidaan näyteputken pohjaan tiheyksiltään erilaisten liuosten läpi. Swim-up- menetelmässä liikkuvat siittiöt uivat näyteputken pohjalta viljelynestekerrokseen. Kumpaakin menetelmää käytetään. Näistä menetelmistä gradienttipesu on helpommin standardoitavissa ja sitä käytetään, kun halutaan määrällisesti paljon siittiöitä. Tämän opinnäytetyön tarkoituksena oli vertailla swim-up- ja gradienttisentrifugointimenetelmän avulla saatavien spermanäytteiden eroavaisuutta. Menetelmien vertailuun käytettiin Turun Yliopistollisen Keskussairaalan IVF-laboratorion asiakasnäytteitä. Asiakasnäytteitä oli 23 ja jokaiselle näytteelle tehtiin sperma-analyysi, morfologinen määritys ja näyte pestiin kahdella eri pesumenetelmällä. Tämän opinnäytetyön tuloksena gradienttisentrifugointimenetelmällä saatiin määrällisesti enemmän siittiöitä kuin swim-up -menetelmällä. Siittiöiden eteenpäin suuntautuva liike oli myös parempaa gradienttimenetelmällä pestyissä näytteissä. Morfologia-analyysin perusteella, kumpikin menetelmä antoi samankaltaisia tuloksia, joten niiden perusteella ei voida sanoa, kumpi menetelmä olisi parempi erottelemaan morfologialtaan poikkeavia siittiöitä.

In 2012, the Turku University Hospital of Women’s disease Fertility laboratory had a total of 3698 patient contacts from which 468 were insemination, IVF and ICSI treatments. Before selecting infertility treatment method the quality of sperm is studied in semen analysis. Most important indicators of the sperm quality are the sperm quantity in millions per milliliter, motility and morphology characteristics of spermatozoa; where the sperm head, mid-piece and tail abnormalities are studied. Morphology has been linked to sperm quality and to the sperms ability to fertilize an oocyte. After the semen analysis but before each fertilization treatment, sperm is washed. The purpose of washing is to separate the most motility spermatozoa from semen plasma and other debris. There are two main techniques to separate viable motile sperm: gradient centrifugation and swim-up-washing method. In gradient centrifugation method, the motility sperm is centrifuged to the bottom of the sample tube by using different densities of solutions. In swim-up method, the motility spermatozoon swims from the basis of the sample tube to the layer of culture medium. Both methods are being used. Between these methods, the gradient is easier to standardize and it’s used when lots of spermatozoa is wanted. The purpose of this thesis was to compare swim-up and gradient centrifugation methods and the differences between the obtained results. Customer samples from Turku University Central Hospital IVF laboratory were used for the comparison. 23 customer samples went through semen analysis, morphology assessment and the samples were washed using both methods. As a result of this thesis, gradient centrifugation method gave more spermatozoa than the swim-up method. Also the sperms forward motion was better when gradient method was used. Based on morphology, conclusions can’t not be made on which method would be a better choice since the results are quite equal.