Hyaluronihapon spektrofotometrisen määritysmenetelmän kehittäminen
Rostén, Miikka (2015)
Rostén, Miikka
Turun ammattikorkeakoulu
2015
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201505087041
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201505087041
Tiivistelmä
Hyaluronaani eli hyaluronihappo on elimistön kudoksissa esiintyvä luonnollinen polymeeri, jota käytetään muun muassa kosteuttavana ja voitelevana ainesosana silmän ja piilolinssien hoitonesteissä. Uuden silmätippavalmisteen laadunvarmistukseen tarvittiin mittausmenetelmä ennen tuotteen myynnin aloittamista. Tässä tutkimuksessa kehitettiin menetelmä hyaluronihappopitoisuuden määrittämiseksi silmätippaliuoksessa.
Tutkimuksen lähtökohtana käytetään aikaisemmassa tutkimuksessa fermentointituotteen hyaluronihappopitoisuuden määrittämiseen kehitettyä menetelmää. Menetelmä perustuu hyaluronihapon ja kationisen pinta-aktiivisen setyylitrimetyyliammoniumbromidin (CTAB) väliseen reaktioon, jossa muodostuu samea suspensio. Suspension sameus (turbiditeetti) on suoraan verrannollinen hyaluronihappopitoisuuteen ja sitä voidaan mitata absorbanssin avulla.
Tietyllä hyaluronihappopitoisuusalueella ja aallonpituudella spektrofotometrisessä mittauksessa saadaan lineaarinen absorbanssivaste. Seoksen on annettava reagoida aina sama aika ennen mittaushetkeä, jotta saadaan toistettavia tuloksia. Reaktioaikaa tutkittiin mittaamalla seoksen absorbanssia eri aikapisteissä.
Reagenssien lämpötilalla ei ollut vaikutusta mittaustuloksiin, kun reaktiota tutkittiin kolmessa eri lämpötilassa. Myöskään pH ei muutu reaktiossa. Ennen mittausta seosta sekoittaessa on oltava tarkkana, sillä suuret leikkausvoimat saattavat vahingoittaa syntyneitä ionisia sidoksia hyaluronaanin ja CTAB:n välillä. Tutkimuksessa otettiin myös huomioon menetelmän käytännölliseen suorittamiseen ja mittausepävarmuuteen liittyviä tekijöitä.
Tutkimuksen lähtökohtana käytetään aikaisemmassa tutkimuksessa fermentointituotteen hyaluronihappopitoisuuden määrittämiseen kehitettyä menetelmää. Menetelmä perustuu hyaluronihapon ja kationisen pinta-aktiivisen setyylitrimetyyliammoniumbromidin (CTAB) väliseen reaktioon, jossa muodostuu samea suspensio. Suspension sameus (turbiditeetti) on suoraan verrannollinen hyaluronihappopitoisuuteen ja sitä voidaan mitata absorbanssin avulla.
Tietyllä hyaluronihappopitoisuusalueella ja aallonpituudella spektrofotometrisessä mittauksessa saadaan lineaarinen absorbanssivaste. Seoksen on annettava reagoida aina sama aika ennen mittaushetkeä, jotta saadaan toistettavia tuloksia. Reaktioaikaa tutkittiin mittaamalla seoksen absorbanssia eri aikapisteissä.
Reagenssien lämpötilalla ei ollut vaikutusta mittaustuloksiin, kun reaktiota tutkittiin kolmessa eri lämpötilassa. Myöskään pH ei muutu reaktiossa. Ennen mittausta seosta sekoittaessa on oltava tarkkana, sillä suuret leikkausvoimat saattavat vahingoittaa syntyneitä ionisia sidoksia hyaluronaanin ja CTAB:n välillä. Tutkimuksessa otettiin myös huomioon menetelmän käytännölliseen suorittamiseen ja mittausepävarmuuteen liittyviä tekijöitä.