Automaattisen Previ®Color gramvärjäyslaitteen validointi

Abstract

Gramvärjäys on yksi käytetyimmistä mikrobien tunnistustavoista kliinisessä mikrobiologiassa. Gramvärjäykseen on kehitetty laite, joka tekee värjäyksen vaiheet automatisoidusti.

Pohjois-Suomen laboratoriokeskuksen liikelaitoskuntayhtymä NordLab Kemin aluelaboratorion mikrobiologian laboratorioon on hankittu Biomerieuxin valmistama Previ®Color gramvärjäysautomaatti. Laitteen validointi ja ajo-ohjelmien laadinta olivat tekemättä. Opinnäytetyömme oli projektiluontoinen tutkimus, jonka tavoitteena oli tehdä Previ®Color gramvärjäysautomaatille validointi sekä testata tarvittava määrä ajo-ohjelmia eri näytetyypeille, koska laitteen perusohjelmalla suoritetut värjäykset eivät ole olleet laadultaan tarpeeksi hyviä.

Työn tietoperusta hankittiin pääasiallisesti alan kirjallisuudesta, koska gramvärjäyksestä ja sen perusteista oli vain erittäin vanhoja artikkeleita alan tietokannoissa. Varsinainen tutkimustyö toteutettiin NordLabin Kemin aluelaboratorion mikrobiologian laboratoriossa Länsi-Pohjan keskussairaalassa.

Esitestauksessa värjäysautomaatin parametrit optimoitiin valmistamalla laboratorion omista tunnetuista ATCC-bakteerikannoista riittävä määrä levityspreparaatteja ja värjäämällä ne. Laitteen värjäyksen laatua testattiin myös normaaleilla potilasnäytteillä. Kaikki värjätyt objektilasit mikroskopoitiin. Optimaalisen värjäysohjelman löydyttyä tehtiin uudet puhdasviljelyt standardikannoista ja valmistettiin objektilaseille levityspreparaatit. Vakiokantojen lisäksi valmistettiin levityspreparaatteja tuoreista potilasnäytteistä, joiden bakteeriviljelytulos tunnettiin. Näytteiden avulla testattiin laitteen toimivuutta. Validoinnissa testattiin sekä toistettavuutta että uusittavuutta ajamalla samoja näytteitä 10 kertaa optimaalisella värjäysohjelmalla ja ottamalla vakiokannat mukaan jokaiseen ajoon. Myös kaikki validoinnin objektilasipreparaatit mikroskopoitiin. Vertailumenetelmänä laitteen värjäystulokselle käytettiin manuaalista gramvärjäystä.

Tuloksena saatiin määritettyä laitteelle ajo-ohjelma, jolla tutkittavat näytteet värjäytyivät optimaalisesti. Laitteelle oli laitevalmistajan tekemän ohjeen lisäksi tehty NordLabin Rovaniemen laboratoriossa lyhyt käyttöohje. Tämä ohje tarkistettiin ja otettiin käyttöön myös Kemin aluelaboratoriossa. Laitteen käyttäjille, kliinisen mikrobiologian laboratorion henkilöstölle, annettiin laitteen käyttökoulutus.

Työn tuloksia voidaan hyödyntää myös muissa värjäyslaitteen käyttöönotoissa sekä mikrobiologisten menetelmien validoinneissa.

Gram staining is one of the most common identification methods in bacteriology. It is a differen-tial staining process, which divides bacteria into two categories; gram negative and gram posi-tive. NordLab Kemi area laboratory owns a Previ®Color gram staining device manufactured by Biomerieux. This automated device does all the gram staining stages automatically, which leaves more time to analyse microbiological samples.

This paper reports a project study of Previ®Color gram staining device validation and staining parameter optimization. Assigner of this project was NordLab Kemi area laboratory in Länsi-Pohja Central Hospital.

Pretests were carried out with two different ATCC bacterial species and numerous patient sam-ples to find optimal staining parameters. After pretests validation stainings were done with new samples from ATCC bacterial species and patients. 10 copies were made out of each microbio-logical sample and stained separately to find out repeatability of the device and sample variation between stainings.

Results revealed that Previ®Color gram staining process is stable and can be used in daily basis at the laboratory. Optimal staining parameters give good contrast between gram positive and gram negative bacteria. Microbiology laboratory personnel were given instructions on how to use Previ®Color gram staining device and on different maintenance procedures.

These results and information of this report can be used in similar validation processes and stain-ing device introductions.