Kohdeproteiinin puhdistaminen vasta-aineiden tuotantoa varten ja IEMA-testin optimointi liittyen endometrioosin diagnostiikkaan

Abstract

Endometrioosi on sairaus, jossa kohdun limakalvon kaltaista kudosta esiintyy kohdun ulkopuolella. Endometrioosin nykydiagnostiikka on haasteellista, sillä siihen ei ole vielä spesifistä tutkimusmenetelmää ja samankaltaisia oireita tavataan myös muissa sairauksissa. Endometrioosia esiintyy jopa 10 %:lla hedelmällisessä iässä olevilla naisilla ja tutkimusten mukaan jopa 50 %:lla lapsettomuuspotilaista. Endometrioosiin ei ole parantavaa hoitoa ja se vaikuttaa naisen hedelmällisyyteen sekä heikentää potilaan terveyteen liittyvää elämänlaatua.

Opinnäytetyö oli osa Medix Biochemican kumppanuus-diagnostiikkaprojektia, joka tähtää endometrioosin uudenlaiseen diagnostiikkaan ja lääkehoidon kehittämiseen yhteistyökumppaneiden kanssa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli puhdistaa kohdeproteiini-2:ta sekä optimoida diagnostista IEMA-testiä kohdeproteiini-1:lle.

Tavoitteina oli puhdistaa kohdeproteiini-2 niin, että sitä voidaan tulevaisuudessa käyttää sille spesifisten vasta-aineiden kehitykseen. Toisena tavoitteena oli löytää diagnostiselle IEMA-testille sopivin näytemateriaali ja laimennossuhde. Tavoitteena oli myös saada selville lääkeaineen vaikutus testin toimintaan eli sitoutuuko proteiini-1 kuoppalevyn pohjalla olevaan vasta-aineeseen lääkeaineen läsnäolosta huolimatta ja pystyykö tällöin myös HRP-leimattu vasta-aine sitoutumaan.

Tulokset vahvistivat kohteena olevan proteiini-2:n puhdistuksen olevan haasteellista. Varmaa tietoa puhtaan proteiinin määrästä eikä sen puhtaudesta saatu. IEMA-testin optimoinnissa saatiin selville, että paras laimennossuhde oli 1:8 ja paras näytemateriaali seerumi. Testin optimoinnin toisessa työssä huomattiin, että endometrioosin hoitoon kehitetty lääkeaine ei vaikuta IEMA-testin toimintaan.

Endometriosis is a disease in which the tissue similar to the endometrium is found outside the uterus. Currently the diagnostics of endometriosis is challenging, because there is no specific diagnostic test yet available and similar symptoms also occur in other diseases. It is estimated that endometriosis occurs in up to 10 % of female at reproductive age and according to studies even 50 % of infertile females have endometriosis. There is no medical treatment for endometriosis and it affects to female's fertility as well as impairs the health-related quality of life.

This thesis is a part of Medix Biochemica's Companion-Diagnostics-project. The aim of the project is to develop a new diagnostic device and treatment for endometriosis with co-operation with pharmaceutical partner. The purpose of this thesis was to purify protein-2 and to set-up and optimise a diagnostic IEMA-test to measure protein-1 concentration from patient samples.

Technical purpose of this work was to purify protein-2 so that it could be used for antibody production in the future. Additional aim was to verify a suitable sample material and dilution ratio for measurement of protein-1 concentration by IEMA-test. There was also an interest in knowing if the drug under development has an influence on the performance of IEMA-test. In detail was tested, does the protein-1 bind to the antibody despite in the presence of the drug and in that case is the HRP-labeled antibody also capable for binding.

Precise information about the purity and amount of the protein-2 after purification was not gained. Results from the IEMA-test after optimisation indicated that the best sample material was serum with the dilution 1:8. It was also discovered that the drug under development for the treatment of endometriosis doesn't have effect on the performance of the IEMA- test