Hyppää sisältöön
    • Suomeksi
    • På svenska
    • In English
  • Suomi
  • Svenska
  • English
  • Kirjaudu
Hakuohjeet
JavaScript is disabled for your browser. Some features of this site may not work without it.
Näytä viite 
  •   Ammattikorkeakoulut
  • Metropolia Ammattikorkeakoulu
  • Opinnäytetyöt
  • Näytä viite
  •   Ammattikorkeakoulut
  • Metropolia Ammattikorkeakoulu
  • Opinnäytetyöt
  • Näytä viite

Construction of cloning vectors for Spo20 mediated membrane anchoring of hyaluronic acid metabolic pathway enzymes in Pichia pastoris

Taskinen, Juuso (2017)

Avaa tiedosto
Juuso_taskinen.pdf (1.758Mt)
Lataukset: 


Taskinen, Juuso
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2017
All rights reserved
Näytä kaikki kuvailutiedot
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2017060111835
Tiivistelmä
Tämä insinöörityö tehtiin Teknologian tutkimuskeskuksen VTT Oy:n production host engineering -tutkimusryhmälle. Työ tehtiin osana Suomen Akatemian rahoittamaan SynBio-Pol-projektia, jonka tavoitteena on tutkia erilaisia skaffolding- ja ankkurointitekniikoita metaboliareittien, kuten, hyaluronihapon saantojen parantamiseksi.

Hyaluronihappo on molekyylipainoltaan suurin polymeeri, joka rakentuu glukuronihaposta ja N-asetyyliglukosamiinista, jotka ovat linkittyneet toisiinsa β1,3- ja β1,4-glykosidisidoksin. Hyaluronihappoa syntetisoi transmembraaniproteiini hyaluronihapposyntaasi. Hyaluroni-happosyntaasi on yleinen proteiini sekä nisäkkäiden että sammakkoeläimien solukalvoilla.

Tämän insinöörityön tarkoituksena oli tutkia, mikäli Saccharomyces cerevisiaen itiöinti-spesifistä proteiini 20:tä voitaisiin käyttää ankkuroimaan hyaluronihapon metaboliaentsyymejä solun kalvoille. Metaboliaentsyymien lokalisaatio solussa oli tarkoitus tarkistaa rakentamalla fuusioproteiini, jossa metaboliaentsyymin terminaaleihin olisi kiinnitetty itiöinti-spesifinen proteiini 20 ja vastakkaiseen terminaaliin fluoresoiva proteiini.

Tämä insinöörityö ei saavuttanut kaikkia sille asetettuja tavoitteita, ja vain ekspressiovektorit, johon geenit xhasA2 ja xhasB oli liitetty, ehdittiin rakentaa. Kloonatut plasmidit seulottiin pesäke-PCR:llä, jonka jälkeen niiden rakenne varmistettiin restriktioentsyymianalyysilla sekä sekvensoinnilla. Oikein rakentuneet vektorit linearisoitiin Bgl-II-entsyymillä, jonka jälkeen ne transformoitiin Pichia pastorikseen elektroporaatiolla. Transformantit seulottiin pesäke-PCR:llä, jonka avulla löydettiin muutama potentiaalinen rekombinantti Pichia pastoris -kanta.
 
Kokoelmat
  • Opinnäytetyöt
Ammattikorkeakoulujen opinnäytetyöt ja julkaisut
Yhteydenotto | Tietoa käyttöoikeuksista | Tietosuojailmoitus | Saavutettavuusseloste
 

Selaa kokoelmaa

NimekkeetTekijätJulkaisuajatKoulutusalatAsiasanatUusimmatKokoelmat

Henkilökunnalle

Ammattikorkeakoulujen opinnäytetyöt ja julkaisut
Yhteydenotto | Tietoa käyttöoikeuksista | Tietosuojailmoitus | Saavutettavuusseloste