Pregabaliinin ja gabapentiinin määritysmenetelmän kehittäminen ja validointi

Abstract

Opinnäytetyö suoritettiin Terveyden ja hyvinvoinnin laitoksen oikeustoksikologian osastolla, Tilkanmäen yksikössä.

Työn tavoitteena oli uudistaa käytössä oleva pregabaliinin ja gabapentiinin akkreditoitu määritysmenetelmä verestä ja virtsasta käyttäen positiiviseen paineeseen perustuvaa semiautomaattista uuttokammiota. Pregabaliini ja gabapentiini ovat mm. epilepsian hoidossa käytettäviä lääkeaineita, mutta niitä on havaittu olevan myös päihdekäytössä. Käytössä oleva määritysmenetelmä on raskas käsille, koska tarvittava paine saadaan aikaan pipetoimalla käsin. Uusi uuttokammio toimii pelkästään typpikaasun avulla, eikä tarvitse sähköä.

Menetelmässä käytettiin Agilentin GC-MS-laitteistoa elektroni-ionisaatiolla, positiivisella moodilla, elektronimonistimella ja SIM-menetelmällä. Yhdisteet uutettiin verestä kiinteäfaasiuutolla käyttäen Biotagen Positive Pressure+ 48 -uuttokammiota.

Näytematriisien mittausalue saatiin laajemmaksi ja molemmille matriiseille saatiin määritettyä matalampi määritysraja. Verimatriisille alemmaksi määritysrajaksi saatiin 1 μg/ml ja virtsamatriisille 2 μg/ml. Ylemmäksi määritysrajaksi verimatriisille saatiin 40 μg/ml, virtsalle ei ylempää määritysrajaa määritetty.

Menetelmän validointi uudelle uuttokammiolle onnistui hyvin ja laite saatiin laboratoriossa rutiinikäyttöön osaksi jo käytössä olevaa määritysmenetelmää.

This work was carried out at the National Institute for Health and Welfare Tilkanmäki Forensic Toxicology unit in Helsinki.

The aim of the validation was to develop the method in use for the quantitation of pregabalin and gabapentin. The old method is quite heavy to perform, because the pressure required is done by manual pipetting. The new updated method uses a manifold which is based on positive pressure and runs with nitrogen gas only; no electricity is needed.

The compounds of interest were extracted using Biotages Positive Pressure+ 48 -manifold with solid phase extraction cartridges and were analyzed with gas chromatography - mass spectrometry. Ionization was conducted by electron ionization (EI) using positive ion mode. Electron multiplier was used as a detector.

The measurement range of this method got wider and both matrices obtained a new lower quantification limit. The new lower quantification limit for blood matrix was 1 μg/ml and 2 μg/ml for urine. The new upper quantification limit for blood matrix was 40 μg/ml. For urine matrix, no upper quantification limit was determined.

The new manifold suited well for the method and was taken as a part of the routine in use.