Olantsapiinin kvantitatiivinen määritys seerumista LC-MS/MS-tekniikalla – menetelmän kehitys ja validointi

Abstract

Opinnäytetyö suoritettiin Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy:n (YML) huume-, lääkeaine- ja dopinganalytiikan osastolla.

Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää ja validoida antipsykoottiselle lääkeaineelle, olantsapiinille, uusi ja nopea proteiinisaostukseen ja nestekromatografia-massaspektrometria-tekniikkaan perustuva kvantitointimenetelmä seerumista vanhan neste-nesteuuttoon ja nestekromatografiaan perustuvan menetelmän tilalle. Kehitysvaiheessa optimoitiin näytteen esikäsittelyssä käytettävät reagenssit ja näyte-liuotin-suhde, sekä kromatografian parametrit. Lisäksi analyysin kalibrointi- ja kontrollialuetta laajennettiin. Menetelmän kehityksessä pyrittiin myös ottamaan huomioon samalla laitteistolla suoritettavat analyysit, jotta rutiinianalytiikka olisi mahdollisimman sujuvaa.

Validointi suoritettiin YML:n oman validointiohjeen, sekä European Medicines Agencyn (EMA) ohjeen ”Guideline on bioanalytical method validation, 2012” perusteella. Kyseinen EMA:n dokumentti määrittelee biologisia matriiseja käyttävien kvantitatiivisten menetelmien validoinnin pääkohdat ja antaa suosituksia validoitavien ominaisuuksien määrittämiseksi.

Projektissa validoitavat parametrit täyttivät hyväksyttävät kriteerit, ja menetelmä otettiin käyttöön rutiinianalytiikkaan välittömästi validoinnin valmistumisen jälkeen.

This study was performed at the narcotic-, doping analytics, and therapeutic drug monitoring section of the United Medix Laboratories Ltd.

The aim of the study was to develop and validate a new, fast quantitation method from serum based on protein precipitation and liquid chromatography-mass spectrometry for the antipsychotic drug olanzapine. The method is to replace the old method based on liquidliquid extraction and liquid chromatography. In the development phase the reagents used in the sample preparation and sample-solvent ratio was optimized along with the chromatography parameters. The calibration-, and control ranges were also extended. Other analyses performed on the same apparatus were considered in the development to ensure fluid routine analytics.

The validation was carried out according to an internal validation directive along with the directive ”Guideline on bioanalytical method validation, 2012” by the European Medicines Agency (EMA). The directive specifies the main points, and gives recommendations on determining the validation parameters for methods using biological matrices.

The parameters determined in the validation fulfilled the required criteria, and the method was applied into routine analytics immediately after the validation was finished.