Lämpötilan vaikutus Trichomonas vaginaliksen elinkykyyn ja Vagicult®-näyteputken viljelykelpoisuus pakastamisen jälkeen

Abstract

Tämän työn tavoitteena oli selvittää miten Trichomonas vaginalis -organismit selviytyvät eri lämpötiloissa eripituisia aikoja ja onko Vagicult-näyteputki viljelykelpoinen pakastamisen jälkeen. Tavoitetta lähestyttiin vaiheittain tekemällä laboratoriossa mikroskopointiin ja rikastusviljelyyn perustuvia kvalitatiivisia kokeita.

T. vaginalista inkuboitiin optimilämpötilasta poikkeavissa lämpötiloissa +22 °C:ssa ja +4 °C:ssa, minkä jälkeen näyte siirrettiin oikeaan optimaaliseen kasvatuslämpötilaan +37 °C:een. Kasvatusta jatkettiin 48 tuntia. Mikroskopoimalla tutkittiin miten optimista poikkeavat lämpötilat vaikuttivat T. vaginalis -kannan selviytymiseen eli olivatko parasiitit elossa vai eivät. Samanaikaisesti muiden kokeiden kanssa testattiin onko Vagicult-putki viljelykelpoinen pakastamisen jälkeen käyttämällä pakastettuja putkia rinnakkain pakastamattomien kanssa.

Työn kokeiden tulokset osoittavat T. vaginaliksen selviävän hyvin vaihtelevissa lämpötiloissa. Kahdeksan tunnin säilytys +22 °C:ssa ja kuuden tunnin säilytys +4 °C:ssa ei vaikuta merkitsevästi T. vaginalisten elinkykyyn. Kahdeksan tunnin +4 °C:ssa säilyttämisen jälkeen T. vaginalisten kuolleisuus nousee ja elinkyky heikkenee. Työn tulosten mukaan Vagicult-putket kestävät lyhytaikaisen pakastamisen.

Työn tulosten perusteella on vaikeaa antaa suoraviivaisia toimintaohjeita potilasnäytteiden käsittelyyn ja aihe vaatii lisätutkimuksia. Tulevaisuudessa olisi hyvä tutkia rikastuvatko erittäin pienet määrät T. vaginaliksia Vagicult-putkissa ja miten oikea potilasnäyte selviäisi optimista poikkeavissa kuljetus- tai säilytyslämpötiloissa.

The objective of this study was to find out how the Trichomonas vaginalis -organisms survive in diverging temperatures for different periods of times and if the Vagicult-sample tube is valid for culturing T. vaginalis after being frozen and melted. This study consists of qualitative experiments based on wet mount microscopy and enrichment of T. vaginalis.

T. vaginalis -parasites were incubated in the Vagicults’ culture medium at +22 °C and +4 °C, neither of which is the optimum temperature for T. vaginalis. After incubation the sample tubes were moved to the optimum temperature of +37 °C. The cultures were carried on for 48 hours. By culture and wet mount microscopy I studied how the temperatures affected the viability of T. vaginalis in +22 °C and +4 °C temperatures. Simultaneously with other experiments, the Vagicult sample tubes were tested for their freezing abilities in order to find out if the tubes were valid for T. vaginalis -culture after they had been frozen up solid and melted back to liquid. The melted Vagicult-tubes were tested in parallel with the fresh unfrozen ones.

The results of this study indicate that the T. vaginalis tolerates diverging temperatures very well. Preserving Vagicults with the T. vaginalis in +22 °C for eight hours or in +4 °C for six hours has no remarkable effect on the parasite or its viability. However, after eight hours in +4 °C the death rate of T. vaginalis arises and the viability weakens. The results also show that a short-term freezing of the Vagicult-sample tubes does not have a remarkable effect on the tube.

Nonetheless, it is difficult to give out straightforward directions for handling T. vaginalis -culture samples and the subject demands more study. In the future, it would be useful to study if very small quantities of T. vaginalis enrich in Vagicult-tubes and how a real patient sample would survive in diverging temperatures during transportation and storage.