Monoklonaalisten fosfatidyylietanolivasta-aineiden tuottaminen, puhdistaminen ja testaaminen
Taskila, Emmi; Koistinen, Anu (2010)
Taskila, Emmi
Koistinen, Anu
Oulun seudun ammattikorkeakoulu
2010
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2010120116537
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2010120116537
Tiivistelmä
Oulun yliopiston kliinisen tutkimuksen keskuksen sisätautien klinikan alaisuudessa toimivalla professori Markku Savolaisen tutkimusryhmällä on meneillään tutkimus, jonka tavoitteena on kehittää uusi määritysmenetelmä alkoholin suurkulutuksen osoittamiseen. Alkoholin läsnä ollessa elimistössä syntyvä fosfatidyylietanoli on osoittautunut spesifiseksi ja luotettavaksi alkoholin suurkulutuksen merkkiaineeksi. Kehitteillä oleva vasta-aineisiin perustuva määritysmenetelmä mahdollistaisi fosfatidyylietanolin määrittämisen myös pienissä laboratorioissa.
Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia tutkimusryhmän valmistamien hybridoomasolulinjojen tuottamien vasta-aineiden tuottoaikaa ja puhdistusmenetelmiä ja löytää mahdollisimman tehokkaat tavat vasta-aineiden laajaa tuotantoa varten. Tutkimuksessa määritettiin hybridoomasolulinjojen optimaalista fosfatidyylietanolivasta-aineiden tuottoaikaa kasvattamalla niitä kuusi vuorokautta soluviljelyssä. Lisäksi uuden proteiinivapaan solujen kasvatusliuoksen toimivuutta testattiin fosfatidyylietanolivasta-aineiden tuotossa ja puhdistuksessa ioninvaihtokromatografialla. Tutkimuksessa määritettiin myös alhaisinta vasta-aineita tehokkaasti saostavaa polyetyleeniglykolikonsentraatiota. Vasta-aineiden pitoisuuden ja toimivuuden testaamiseen käytettiin ELISA-menetelmiä.
Opinnäytetyön tuloksien perusteella optimaalinen vasta-aineiden tuottoaika 2E9-solulinjalla oli viisi vuorokautta. 2B1-solulinjan tuottoaika oli pidempi kuin testaamamme aika, joten optimaalista tuottoaikaa kannattaisi määrittää pidemmällä aikavälillä. Alhaisin mahdollinen vasta-aineita saostava polyetyleeniglykolipitoisuus oli tulosten perusteella 4 %. Tulokset osoittivat, että proteiinivapaa solujen kasvatusliuos ei sovellu näille kahdelle solulinjalle, sillä molempien solulinjojen tuottamien vasta-aineiden määrä oli pienempi kuin verrattuna toisessa käyttämässämme kasvatusliuoksessa.
Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia tutkimusryhmän valmistamien hybridoomasolulinjojen tuottamien vasta-aineiden tuottoaikaa ja puhdistusmenetelmiä ja löytää mahdollisimman tehokkaat tavat vasta-aineiden laajaa tuotantoa varten. Tutkimuksessa määritettiin hybridoomasolulinjojen optimaalista fosfatidyylietanolivasta-aineiden tuottoaikaa kasvattamalla niitä kuusi vuorokautta soluviljelyssä. Lisäksi uuden proteiinivapaan solujen kasvatusliuoksen toimivuutta testattiin fosfatidyylietanolivasta-aineiden tuotossa ja puhdistuksessa ioninvaihtokromatografialla. Tutkimuksessa määritettiin myös alhaisinta vasta-aineita tehokkaasti saostavaa polyetyleeniglykolikonsentraatiota. Vasta-aineiden pitoisuuden ja toimivuuden testaamiseen käytettiin ELISA-menetelmiä.
Opinnäytetyön tuloksien perusteella optimaalinen vasta-aineiden tuottoaika 2E9-solulinjalla oli viisi vuorokautta. 2B1-solulinjan tuottoaika oli pidempi kuin testaamamme aika, joten optimaalista tuottoaikaa kannattaisi määrittää pidemmällä aikavälillä. Alhaisin mahdollinen vasta-aineita saostava polyetyleeniglykolipitoisuus oli tulosten perusteella 4 %. Tulokset osoittivat, että proteiinivapaa solujen kasvatusliuos ei sovellu näille kahdelle solulinjalle, sillä molempien solulinjojen tuottamien vasta-aineiden määrä oli pienempi kuin verrattuna toisessa käyttämässämme kasvatusliuoksessa.