Trinitrotolueenin vaikutus sinisimpukan (Mytilus trossulus) metaboliaentsyymiaktiivisuuteen
Huovinen, Iida (2019)
Huovinen, Iida
2019
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2019102820311
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2019102820311
Tiivistelmä
Tämän opinnäytetyön tavoitteena oli ottaa käyttöön menetelmät kolmen eri metaboliaentsyymin aktiivisuuden määrittämiseksi trinitrotolueenille (TNT) altistettujen sinisimpukoiden (Mytilus trossulus) lihasnäytteistä. Kiinnostuksenkohteena olivat anaerobiseen energia-aineenvaihduntaan osallistuvat oktopiinidehydrogenaasi (ODH) ja fosfoenolipyruvaattikarboksikinaasi (PEPCK) sekä aerobiseen energia-aineenvaihduntaan osallistuva pyruvaattikinaasi (PK). Työn tavoitteena oli myös tutkia, ilmentääkö TNT:lle altistuminen muutoksia simpukan normaalissa energia-aineenvaihdunnassa. Työ tehtiin Suomen ympäristökeskuksen merikeskuksessa.
Sinisimpukat altistettiin erilaisille TNT-pitoisuuksille kahdessa kestoltaan erilaisessa kokeessa: kroonisessa ja akuutissa altistuskokeessa. Metaboliaentsyymiaktiivisuudet määritettiin simpukoiden lihasnäytteistä spektrofotometrisillä menetelmillä. PK-ja PEPCK-aktiivisuudet määritettiin valmiilla kaupallisilla tuotteilla ja ODH-aktiivisuus tieteellisten artikkelien pohjalta kootulla menetelmällä.
Entsyymiaktiivisuusanalyyseissä tilastollisesti merkitseviä eroja havaittiin kaikissa TNT-pitoisuuksissa PEPCK-aktiivisuuksien osalta kontrollikäsittelyjen sekä näytekäsittelyjen välillä. PK-aktiivisuuksien osalta tilastollisesti merkitsevästi erosi yksi näytekäsittely, jossa TNT-pitoisuus oli 0,62 mg/l. ODH-aktiivisuuksissa ei havaittu tilastollisesti merkitseviä eroja kontrolli-ja näytekäsittelyjen välillä.
Menetelmät osoittautuivat toimiviksi, ja entsyymiaktiivisuudet saatiin määritettyä jokaisen metaboliaentsyymin osalta. Toimivuudestaan huolimatta kaupallisten tuotteiden käytön mielekkyyttä tulevaisuudessa tulee kuitenkin vielä arvioida, sillä tässä työssä käytettyjen tuotteiden protokollien reaktiolämpötilat erosivat toisistaan. Käyttöön tulisi valita sellaiset menetelmät, joissa mittaukset voitaisiin suorittaa samassa lämpötilassa, mikä tekisi saaduista tuloksista keskenään vertailukelpoiset.
Sinisimpukat altistettiin erilaisille TNT-pitoisuuksille kahdessa kestoltaan erilaisessa kokeessa: kroonisessa ja akuutissa altistuskokeessa. Metaboliaentsyymiaktiivisuudet määritettiin simpukoiden lihasnäytteistä spektrofotometrisillä menetelmillä. PK-ja PEPCK-aktiivisuudet määritettiin valmiilla kaupallisilla tuotteilla ja ODH-aktiivisuus tieteellisten artikkelien pohjalta kootulla menetelmällä.
Entsyymiaktiivisuusanalyyseissä tilastollisesti merkitseviä eroja havaittiin kaikissa TNT-pitoisuuksissa PEPCK-aktiivisuuksien osalta kontrollikäsittelyjen sekä näytekäsittelyjen välillä. PK-aktiivisuuksien osalta tilastollisesti merkitsevästi erosi yksi näytekäsittely, jossa TNT-pitoisuus oli 0,62 mg/l. ODH-aktiivisuuksissa ei havaittu tilastollisesti merkitseviä eroja kontrolli-ja näytekäsittelyjen välillä.
Menetelmät osoittautuivat toimiviksi, ja entsyymiaktiivisuudet saatiin määritettyä jokaisen metaboliaentsyymin osalta. Toimivuudestaan huolimatta kaupallisten tuotteiden käytön mielekkyyttä tulevaisuudessa tulee kuitenkin vielä arvioida, sillä tässä työssä käytettyjen tuotteiden protokollien reaktiolämpötilat erosivat toisistaan. Käyttöön tulisi valita sellaiset menetelmät, joissa mittaukset voitaisiin suorittaa samassa lämpötilassa, mikä tekisi saaduista tuloksista keskenään vertailukelpoiset.