Poistogeenisen Escherichia coli -kannan luominen P1-bakteriofagi menetelmällä

Abstract

Työn aiheena on poistogeenisen Escherichia coli -kannan luominen molekyylibiologian tarpeisiin käyttäen P1-bakteriofagimenetelmää. Tavoitteena oli kehittää toistettava ja suoraviivainen menetelmä poistogeenisen bakteerin luomiseen käyttäen P1-bakteriofagia transduktiossa.

Työssä käytettiin perinteisiä mikrobiologian ja geenitekniikan menetelmiä kohdebakteerin kasvatuksessa, sekä geneettisen materiaalin monistamisessa, puhdistamisessa ja varmentamisessa. P1-bakteriofagimenetelmän kehittäminen aloitettiin kokeilemalla ja kehittämällä jo olemassa olevia P1-menetelmiä. Näitä menetelmiä toistettiin ja käytäntöjä muutettiin saatujen tulosten mukaisesti.

Työn tuloksena kehitettiin toistettava menetelmä, joka perustuu bakteriofagi P1:den kykyyn toimia transduktiopartikkelina ja siirtää geneettistä materiaalia isäntäsolusta toiseen. Halutun geenin siirtämiseen tarvitaan riittävän suuri populaatio P1-fageja. Koska geneettisen materiaalin pakkaaminen muodostuviin uusiin fageihin on sattumanvaraista, on fagi-populaation oltava riittävän suuri kattamaan isäntäbakteerin perintöaineksen.