Laktoosimääritysmenetelmän validointi HPLC-RI-laitteistolle

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Valion tutkimus- ja tuotekehityksen kemian analyysipalvelulaboratoriossa.

Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia mahdollisuutta korvata meijeriteollisuusnäytteille soveltuva entsymaattinen laktoosimääritysmenetelmä nestekromatografisella menetelmällä. Menetelmän korvaamisesta oltiin kiinnostuneita, sillä uusi menetelmä olisi muun muassa luotettavampi ja kustannustehokkaampi. Kromatografisen menetelmän toimivuutta arvioitiin suorittamalla menetelmälle validointi. Saatuja tuloksia vertailtiin tilastollisin menetelmin.

Validoitava menetelmä oli osittain uusi. Menetelmä oli muunneltu jo käytössä olevasta menetelmästä ja laitevalmistajan antamista suosituksista sopivaksi kokonaisuudeksi. Näytteinä käytettiin meijeriteollisuustuotteita sekä prosessinäytteitä. Validoinnissa tarkasteltiin validoitavalla menetelmällä saatuja tuloksia ja verrattiin referenssimenetelmien tuloksiin. Referenssimenetelmät olivat entsymaattiset menetelmät Laktoosi ja glukoosi entsymaattisesti ja Laktoosi ja galaktoosi entsymaattisesti ja kromatografinen menetelmä Laktoosin määrittäminen ionikromatografisesti korkean suorituskyvyn nestekromatografilla (Dionex).

Validoinnissa tarkasteltiin ensisijaisesti laktoosipitoisuutta mutta myös galaktoosin ja glukoosin tuloksia. Mittausepävarmuuden tulokset olivat hyvät ja niiden mukaan menetelmä oli toimiva. Toistettavuusmittauksien tulokset olivat myös raja-arvojen sisällä. Tilastollisista menetelmistä t-testi antoi raja-arvoja ylittäviä tuloksia, mutta tulos oli odotettavissa. Tästä syystä tulokselle ei annettu ensisijaista painoarvoa lopputulokseen. Validoinnin lopputuloksena oli, että menetelmällä ei voida korvata entsymaattista menetelmää, mutta sillä voidaan määrittää laktoosipitoisuus.

Tuloksista saatiin paljon hyödyllistä tietoa menetelmän toimivuudesta ja sitä voidaan hyödyntää lisättäessä menetelmään uusia sokereita.