Virtaussytometrian optimointi bakteriologisiin tutkimuksiin: Menetelmän optimointi Borrelia sp.-bakteereille sekä Borrelia hermsii-bakteerin komplementtijärjestelmän väistökyvyn tarkastelu
Hukka, Jutta; Mäkelä, Johanna (2020)
Avaa tiedosto
Lataukset:
2020
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202005047074
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-202005047074
Tiivistelmä
Virtaussytometrista tutkimusmenetelmää ei ole aiemmin raportoidusti käytetty Borrelia sp.-bakteereille. Menetelmä kuitenkin mahdollistaa suuren bakteerimäärän laskemisen lyhyessä ajassa. Erilaisten tutkimusmenetelmien kehittäminen mahdollistaa erilaisten näkökulmien hyödyntämisen tuoden monipuolisuutta ja luotettavuutta tutkimustyöhön.
Opinnäytetyö tehtiin Helsingin yliopiston bakteriologian ja immunologian osastolla dosentti Karita Haapasalon ja dosentti Taru Meren ohjauksessa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli optimoida menetelmä, jolla pystytään laskemaan suuria määriä Borrelia sp.-bakteereja virtaussytometrisellä menetelmällä toisintokuumetta aiheuttavaa Borrelia hermsii -bakteeria käyttämällä. Optimoinnissa käytettiin eläviä bakteereja, joita laskettiin fluoresoivan leiman avulla. Optimoinnin lisäksi tämän menetelmän avulla selvitettiin, miten B. hermsii kykenee väistämään komplementtijärjestelmää tuottamansa FhbA-pintaproteiinin avulla. Tämän pintaproteiinin avulla B. hermsii kykenee sitomaan pinnalleen komplementtijärjestelmän säätelijätekijää, tekijä H:ta. Ensin komplementtijärjestelmän tappokykyä tarkasteltiin tavallisessa seeruminäytteessä. Tämän jälkeen näytteeseen lisättiin kilpaileva molekyyli, liukoinen rekombinantti FhbA, jotta nähtiin lisääkö kilpaileva molekyyli komplementtijärjestelmän tappokykyä.
Tulokset osoittivat, että Borrelia sp.-bakteereja voidaan laskea virtaussytometrilla. B. hermsiin kuolleisuus lisääntyi, kun tekijä H:n sitoutumista bakteerin omaan FhbA-pintaproteiiniin estettiin kilpailevalla molekyylillä, liukoisella rekombinantti FhbA:lla. Tämä viittaa siihen, että FhbA on tärkeä molekyyli B. hermsiin seerumissa selviytymisen ja täten oleellinen tekijä sen taudinaiheuttamiskyvyssä.
Opinnäytetyö tehtiin Helsingin yliopiston bakteriologian ja immunologian osastolla dosentti Karita Haapasalon ja dosentti Taru Meren ohjauksessa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli optimoida menetelmä, jolla pystytään laskemaan suuria määriä Borrelia sp.-bakteereja virtaussytometrisellä menetelmällä toisintokuumetta aiheuttavaa Borrelia hermsii -bakteeria käyttämällä. Optimoinnissa käytettiin eläviä bakteereja, joita laskettiin fluoresoivan leiman avulla. Optimoinnin lisäksi tämän menetelmän avulla selvitettiin, miten B. hermsii kykenee väistämään komplementtijärjestelmää tuottamansa FhbA-pintaproteiinin avulla. Tämän pintaproteiinin avulla B. hermsii kykenee sitomaan pinnalleen komplementtijärjestelmän säätelijätekijää, tekijä H:ta. Ensin komplementtijärjestelmän tappokykyä tarkasteltiin tavallisessa seeruminäytteessä. Tämän jälkeen näytteeseen lisättiin kilpaileva molekyyli, liukoinen rekombinantti FhbA, jotta nähtiin lisääkö kilpaileva molekyyli komplementtijärjestelmän tappokykyä.
Tulokset osoittivat, että Borrelia sp.-bakteereja voidaan laskea virtaussytometrilla. B. hermsiin kuolleisuus lisääntyi, kun tekijä H:n sitoutumista bakteerin omaan FhbA-pintaproteiiniin estettiin kilpailevalla molekyylillä, liukoisella rekombinantti FhbA:lla. Tämä viittaa siihen, että FhbA on tärkeä molekyyli B. hermsiin seerumissa selviytymisen ja täten oleellinen tekijä sen taudinaiheuttamiskyvyssä.